檢測及試驗方法

　　材料和試劑

　　D101大孔樹脂(天津南開和成公司)。根皮苷標準品購自美國Sigma公司，純度≥99.0%。流動相所用甲醇為色譜純( Dikma公司)，實驗用水為去離子水。其余試劑均為分析純。荔枝品種為桂味，采自廣州增城船坑果園。

　　實驗方法

　　1.標準品配制：

　　精密稱取根皮苷標準品0.0050g，溶于甲醇中，配制濃度0.02 g·L-1的標準貯備液，使用時稀釋成不同濃度梯度的標準使用液。標準品溶液4℃避光保存。

　　2.樣品前處理:

　　新鮮荔枝果皮(連衣)陰干后，粉碎過40目篩。準確稱取荔枝皮粉末10.0 g，加入70%乙醇150 mL，超聲處理30 min，功率****。過濾后重復提取一次，合并濾液。濾液經旋轉蒸發儀減壓濃縮至70 mL，加入180 mL無水乙醇靜置過夜，濾過，減壓濃縮至醇全部揮發，加入純水150 mL超聲輔助溶解，抽濾，得到粗提液。

　　粗提液上樣至經處理的大孔樹脂柱20 mL，上樣速度1 mL·min-1，然后用純水淋洗至無色(共450mL純水)。再用70%乙醇50mL解吸附，流速1mL·min-1，洗脫液4℃避光保存，得到荔枝皮提取液。

　　3.固相萃取:

　　取荔枝皮提取液5mL通過活化后的固相萃取小柱(活化固相萃取小柱先用10mL甲醇通過小柱，再以10mL純水洗去甲醇，速度均為1 mL·min-1)，速度1mL·min-1，前3 mL流出液棄去，余流出液經0.45μm微孔濾膜后作高效液相色譜檢測。

　　4.高效液相色譜測定條件:

　　以甲醇-0.1%乙酸為流動相進行梯度洗脫(根據本實驗室之前研究結果改良)，甲醇(A) -0.1%乙酸(B，V∶V，pH=3.20)，0～20 min，45%～60% A。進樣量:10μL;柱溫: 40℃;檢測波長286 nm。

　　5.質譜參數設定:

　　采用電噴霧電離源(ESI)，殼氣流速15單位，噴霧電壓3kV，毛細管電壓18V，毛細管溫度200℃，選擇離子掃描，質量數掃描范圍434.50～435.50m/z。

　　實驗結果

　　1.HPLC系統適用性調試結果：

　　分別對研究分析所用HPLC系統進行調試，根皮苷標準品溶液在7.2 min位置出峰;荔枝皮樣品溶液也在此位置上出現目標組分峰，參見圖。處理計算后知:根皮苷保留時間tR= 7.22min。其與周圍可能存在的干擾物分離良好，分離度約為1。

HPLC 圖譜

??? 2.MS系統實用性

　　分別對研究分析所用MS系統進行調試，根皮苷標準品溶液在7.9 min位置出峰;荔枝皮樣品溶液也在8.0 min位置上出現目標組分峰，參見圖2。處理計算后知:根皮苷保留時間tR = 8.0 min。其與周圍可能存在的干擾物分離良好。

HPLC-MS 圖譜

　　3.標準曲線

　　將根皮苷標準儲備液梯度稀釋為0.0100、0.005、0.0025、0.00125、0.000625、0.000312 5 g·L-1標準溶液，在已確定的高效液相色譜條件下，分別將不同濃度的根皮苷標準溶液進樣分析，根據峰面積與標準物質的含量關系進行線性回歸，得到標準曲線為Y = 0.0275X + 0.0739，線性范圍0.000312 5～0.010g·L-1，相關系數(R2)0.9992，表明線性關系良好，能滿足定量分析的要求。

　　4.方法檢測限和定量限

　　以信躁比S/N=3來估算檢測限，根皮苷的檢測限為0.302 mg·L-1，信噪比S/N =10計算出定量限為0.906 mg·L-13.

　　5.精密度、穩定性和重復性試驗

　　精密吸取濃度為0.005 g·L-1的標準溶液，連續進樣5次，峰面積的RSD為0.26%。

　　精密稱取荔枝皮粉末10.0 g，共6份，制備供試品溶液的方法制備溶液，進樣測定，計算得根皮苷含量的RSD為1.84%，表明在該色譜條件下儀器精密度良好。

　　6.加樣回收率試驗

　　精密稱取荔枝皮粉末10.0g，共9份，分別精密加入低( 0.00125g·L-1 )、中(0.005 g·L-1 )、高(0.0100g·L-1 )濃度的標準溶液各2 mL，分別制備供試品溶液的方法制備溶液，進樣測定，計算得平均回收率為99.0%，RSD為1.26%(n=9)。

　　7.若干實際樣品測試檢測結果

　　精密稱取荔枝皮粉末10.0 g，共5份，制備供試品溶液的方法制備溶液，進樣測定，每個樣品重復進樣3次，按標準曲線計算含量，分別為0.001 901、0.001 773、0.001 886、0.001 616和0.001762 g·L-1,平均含量0.001788g·L-1。