基因突變實驗去哪里做?百檢網(wǎng)可做各類基因突變試驗，獨立的生物學檢測中心，包括各細胞基因突變試驗等，出具第三方基因突變實驗檢測報告。

檢測范圍

體外哺乳類細胞基因突變實驗，化妝品基因突變實驗，小鼠淋巴瘤基因突變實驗，酵母菌基因突變實驗，

野生型質(zhì)粒構(gòu)建

1.引物設計：根據(jù)需要驗證的基因序列，設計需要擴增的基因片段引物。

2. 線性化質(zhì)粒：將原始的質(zhì)粒載體，比如 pcDNA3.1 質(zhì)粒，選擇合適的酶切位點，比如 NheI/KpnI 進行酶切，獲得線性化的質(zhì)粒。

3. 質(zhì)粒連接：將線性化的載體與目的基因的連接，推薦在 10~20μl 反應體系中進行連接反應，可以選擇 T4 酶進行黏性末端的連接。

4. 轉(zhuǎn)化涂板：將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到受體菌中(一般為 DH5a)，涂板，培養(yǎng)過夜。次日，挑取平板上單克隆菌落進行搖菌, 送菌液測序，得到野生型質(zhì)粒。

突變型質(zhì)粒構(gòu)建

在得到野生型質(zhì)粒之后，下一步就是對目的基因片段進行突變啦，即將目的基因上面的一個堿基或多個堿基換成另外的堿基。

1.突變引物設計: 向質(zhì)粒進行單點或者多點突變，只需要設計一對引物，進行 PCR 的擴增，替換掉野生型基因的突變位點堿基。

2.突變質(zhì)粒的擴增：突變質(zhì)粒的擴增過程中，需要選用高保真酶 Pfu 酶進行質(zhì)粒擴增, 防止引進新的突變。通過 PCR 過程，突變型質(zhì)粒也得到了擴增。

3. 得到 PCR 產(chǎn)物后，將產(chǎn)物立即置于冰上，然后在 PCR 反應體系中加入 1 微升 Dpn I，混勻后 37℃孵育 1-2 小時。DpnI 能夠識別甲基化位點并將其酶切。從大腸桿菌里提取原始質(zhì)粒模板一般都被甲基化的，DpnI 可以將原始野生型質(zhì)粒模板進行酶切, 而質(zhì)粒擴增的突變型質(zhì)粒不能被酶切從而保留下來。

4. *后，將酶切后產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入大腸桿菌，通過涂板挑取單克隆菌落后，搖菌測序，這樣就可以得到突變基因的質(zhì)粒啦。

檢測標準

《化學品:體外哺乳動物細胞基因突變試驗方法(GB/T 21793-2008)》