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???　　百檢網可進行用于化學品環境管理登記或者是希望對某種特殊的化工產品及其生產過程產生的特征污染物進行環境安全評價所需要進行的魚類急性毒性試驗。

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???如您有需要魚類急性毒性試驗，歡迎咨詢工程師電話180? 1813? 1362　

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???　　百檢網（FTS）是具有豐富經驗的第三方百檢網認證、檢驗、備案、驗貨驗廠機構。我們在紡織品百檢網、食品百檢網、玩具百檢網、油品百檢網、化學品百檢網等領域，提供有害物質、毒理、生態毒理、商城入駐等百檢網服務；CertiPUR-US海綿認證（美國官方指定合作機構）、德國藍天使認證、芬蘭M1認證、消毒產品備案認證、LHAMA認證、TRA認證；新化學物質申報；驗貨、驗廠等服務。

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???　　百檢網與國內外**的具備受認可資質的實驗室、認證機構進行合作，已成功服務近萬家企業，百檢網標準包含國際ISO、歐標、美標、國標GB等。
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???　　百檢網擁有一批年輕、敬業、高效、專業的團隊成員，憑借人才、技術、信息、百檢網、認證、備案、檢驗、驗貨、驗廠等方面的強大資源優勢和支撐，以誠信的品質、專業的技術能力，向客戶提供公正、可靠的全面解決方案。

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???魚類急性毒性試驗，是水生生態毒理學的重要內容之一，并廣泛應用于水域環境污染監測工作中，對控制工業廢水的排放、保護水域環境、發展漁業生產，制定漁業水質標準，具有重要意義。

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???一、實驗原理

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???魚類對水環境的變化反應十分靈敏，當水體中的污染物達到一定程度時，就會引起一系列中毒反應，例如行為異常、生理功能紊亂、組織細胞病變、直至死亡。在規定的條件下，使魚接觸含不同濃度受試物的水溶液，實驗至少進行24h，*好以96h為一個實驗周期，在24h、48h、72h、96h時記錄實驗魚的死亡率，確定魚類死亡50%時的受試物濃度。魚類毒性試驗在研究水污染及水環境質量中占重要地位。通過魚類急性毒性試驗可以評價受試物對水生生物可能產生的影響，以短期暴露效應表明受試物的毒害性。魚類急性毒性試驗不僅用于測定化學物質毒性強度、測定水體污染程度、檢查廢水處理的有效程度，也為制定水質標準、評價環境質量和管理廢水排放提供環境依據。

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???二、實驗材料

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???1、試驗用魚的選擇與馴養

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???試驗用的魚必須對毒物敏感，應具有代表性，便于在實驗條件下飼養，來源豐富，個體健康。我國可采用的試驗魚有四大養殖淡水魚（青魚、草魚、鰱魚和鳙魚）、金魚、鯽魚等。

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???在同一實驗中要求試驗魚必須同屬、同種、同齡，*好是當年生。魚的平均體長以7cm以下為宜。金魚體短、身寬，一般以3cm以下較為合適。同組魚中*大的體長不應超過*小的體長的1.5倍。

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???選用的試驗魚在試驗前必須在實驗室內經過馴養，使之適應實驗室條件的生活環境和進行健康選擇。馴養魚應該與試驗相同水質水溫的水體中至少馴養7天，使其適應試驗環境，不應長期養殖（<2個月）。馴養期間，應每天換水，可每天喂食1～2次，但在試驗前**應停止喂食，以免試驗時，剩余餌料及糞便影響水質。馴養期間試驗魚死亡率不得超過5%，否則，可以認為這批魚不符合試驗魚的要求，應該繼續馴養或者重新更換試驗魚進行馴養。

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???試驗前必須挑選健康的魚，即選擇行動活潑、體色光澤、魚鰭舒展完整、逆水性強、大小無太大懸殊、無任何疾病的魚作為試驗魚。任何畸形魚、外觀上反常態的魚都不得作試驗魚。

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???2、實驗儀器設備

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???（1）實驗容器

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???實驗容器一般用玻璃或其他化學惰性材質制成的水族箱或水槽。容器體積可根據試驗魚的體重確定，通常以每升水中魚的負荷不得超過2g（*好為1g），或者其盛水量以每條魚2～3L為宜。一些小型魚類幼魚可選擇500mL或1000mL燒杯為實驗容器。容器的深度必須超過16cm，水體表面積越大越好。同一實驗應采用相同規格和質量的容器。為防止魚類跳出容器，可在容器上加上網罩。實驗容器使用后，必須徹底洗凈，以除去所有毒性殘留物。

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???（2）其他

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???溶解氧測定儀、水硬度計、溫度控制儀、pH計、分析天平。

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???3、實驗用水（稀釋水）及水質條件

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???用來馴養和配制實驗液的水，必須是未受污染的清潔水。一般可采用天然河水、湖水或地下水，但需過濾以除去大的懸浮物質。也可用放置3天以上的自來水。如果試驗目的是評價工業廢水或化學物質對接納水體的影響時，則*好采用接納水體的污染源上游水作為試驗用稀釋水。蒸餾水不適合作稀釋水，因為蒸餾水中已除去了自然界水中的鹽類，與實際差距太大，另外由于蒸餾器的影響，有時使蒸餾水中帶有對魚類不利的金屬離子，影響試驗結果。

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???實驗用水的水質條件一般是指水的溫度、pH、溶解氧、硬度、水中的有機物和水量等。

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???（1）水溫

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???實驗中應保持魚類原來的適應溫度，一般冷水魚溫度為12～18℃，溫水魚溫度為20～28℃。為使得實驗結果可靠，在同一實驗中，溫度的波動范圍不要超過4（即±2℃）。冬天可以通過加熱室內的空氣溫度達到調節水溫的目的，也可以采用電熱棒直接控制調節水溫。

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???（2）pH

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???水的pH與水生生物的代謝作用有密切關系。對毒物的毒性作用也有一定的影響。因此，在實驗中應維持pH在魚類適宜范圍內。一般實驗液的pH在6.7～8.5為宜。如需調節pH，可用1M或0.1M的HCl和NaOH來調節受試物貯備液的pH。調節貯備液的pH時不能使受試物濃度明顯改變，或發生化學反應或沉淀。

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???（3）溶解氧

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???溶解氧是魚類生存的必要條件，它能影響魚類對毒物的敏感性。一般溫水魚要求溶解氧在4mg/L以上，冷水魚要求溶解氧在5mg/L以上。

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???（4）硬度

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???水的總硬度為10～250mg/L（以CaCO3計）。

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???三、實驗步驟

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???1、預試驗

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???用確定正式實驗所需濃度范圍，可選擇較大范圍的濃度系列，如1000mg/L、100mg/L、10mg/L、1mg/L、0.1mg/L。每個濃度放入5條魚，可用靜態方式進行，不設平等組，試驗持續48h～96h。每天至少兩次記錄各容器內的死魚數，并及時取出死魚。求出24h400%死亡濃度和96h無死亡濃度。

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???如果依次預試驗結果無法確定正式試驗所需的濃度范圍，應另選一濃度范圍再次進行預試驗。

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???2、正式實驗

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???根據預試驗得出的結果，在包括使魚全部死亡的*低濃度和96h魚類全部存活的*好濃度之間至少設置5個濃度組，并以幾何級數排布。濃度間隔系數應≤2.2。

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???每個試驗濃度組應至少設2～3個平行，每一系列設一個空白對照。如使用了助溶劑，應增設溶劑對照組，其濃度與試劑中的*高溶劑濃度相同。試驗魚的數目以每組實驗濃度10～20尾合適，不得少于10尾。

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???試驗溶液調節至相應溫度后，從馴養魚群中隨機取出魚并隨機迅速放入各試驗容器中。轉移期間處理不當的魚均應棄除。同一試驗，所有試驗用魚應30min內分組完畢。

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???在24h、48h、72h、96h后檢查受試魚的狀況。如果沒有任何肉眼可見的運動，如鰓的扇動、碰觸尾柄后無反應等，即可判斷該魚已死亡。觀察并記錄死魚數目后，將死魚從容器中取出。應在試驗開始后3h或6h觀察各處理組魚的狀況，并記錄試驗魚的異常行為（如魚體側翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力減弱，色素沉積等）。

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???試驗開始和結束時要測定pH、溶解氧和溫度。試驗期間，每天至少測定一次。

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???至少在試驗開始和結束時，測定實驗容器中試驗液的受試物濃度。

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???試驗結束時，對照組的死亡率不得超過10%。

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???四、實驗報告

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???1、數據處理

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???以暴露濃度為橫坐標，死亡率為縱坐標，在計算機或對數概率紙上，繪制暴露濃度對死亡率的曲線。用直線內插法或常用統計程序計算出24h、48h、72h、96h的半致死濃度（LC50）值，并計算95%的置信限。

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???如果試驗數據不適于計算LC50，可用不引起死亡的*高濃度和引起****死亡的*低死亡濃度估算LC50的近似值，即這兩個濃度的幾何平均值（）。

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???2、化學物質急性毒性分級

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???依據LC50值的大小，可以將化學物質的急性毒性分為劇毒、高毒、中等毒、低毒和微毒5級。
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???魚類急性毒性實驗毒性分級標準

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?????? ???????魚起始LC50（mg/L） ?????	?????? ???????毒性分級 ?????
?????? ???????<1 ?????	?????? ???????劇毒 ?????
?????? ???????1～100 ?????	?????? ???????高毒 ?????
?????? ???????100～1000 ?????	?????? ???????中等毒 ?????
?????? ???????1000～10000 ?????	?????? ???????低毒 ?????
?????? ???????>10000 ?????	?????? ???????微毒（無毒） ?????

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???3、編寫報告

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???在實驗報告中應包括：試驗名稱、目的、試驗原理、試驗的準確起止日期，還有如下幾項：

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???（1）試驗魚的種名、來源、體重、體長、健康和馴化狀況。

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???（2）受試物質名稱、來源物化學性質和保存方法。

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???（3）實驗用水的來源、物化性質和實驗前的處理等。

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???（4）實驗溶液的濃度與配制方法、實驗溫度。

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???（5）實驗條件，如容器形式、實驗液的體積與深度、受試生物數目及負荷率。

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???（6）實驗開始后24h、48h、72h、96h時的LC50值，及其毒性分級。

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???4、注意事項

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???（1）試驗期間，對照組魚死亡率不得超過10%。

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???（2）試驗期間，受試物實測濃度不能低于設置濃度的80%。如果試驗期間受試物實測濃度與設置濃度相差超過20%，則應該以實測受試物濃度來表達試驗結果。

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???（3）試驗期間，盡可能維持恒定條件。
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???? ? 如果您有魚類急性毒性試驗方面的業務，可以撥打工程師電話：180? 1813? 1362，給您更詳細的介紹。

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