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? ? ? ?根據《化妝品監督管理條例》，《化妝品中比馬前列素等5種組分的測定》化妝品補充檢驗方法經國家藥品監督管理局批準，現予發布。

? ? ? 特此公告。

? ? ? 附件：化妝品中比馬前列素等5種組分的測定（BJH 202102）

? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 國家藥監局

2021年9月13日

? ? ? ?1、范圍

? ? ? ?本方法規定了化妝品中比馬前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素、曲伏前列素、他氟前列素的測定方法。

? ? ? ?本方法適用于膏霜乳類、液體類、凝膠類、蠟基類、粉劑類化妝品中比馬前列素等5種組分的定性和定量測定。

? ? ? ?2、原理

? ? ? ?樣品加飽和氯化鈉溶液渦旋，分散混勻，經乙腈超聲提取后，離心，取上清液加水稀釋，采用高效液相色譜儀分離，質譜檢測器檢測。根據保留時間和特征離子對的相對豐度比定性，定量離子對峰面積定量，以標準曲線法計算含量。

? ? ? ?3、試劑和材料

? ? ? ?除另有規定外，本方法中所用試劑均為分析純及以上規格，水為符合GB/T 6682規定的一級水。

? ? ? ?3.1 甲醇，色譜純。

? ? ? ?3.2 乙腈，色譜純。

? ? ? ?3.3 50%乙腈溶液：取乙腈（3.2）、水按體積比1:1混合，搖勻。

? ? ? ?3.4 甲酸，色譜純。

? ? ? ?3.5 乙酸銨，色譜純。

? ? ? ?3.6 氯化鈉，分析純。

? ? ? ?3.7 飽和氯化鈉溶液：稱取40g氯化鈉（3.6），置于250mL磨口錐形瓶中，加入100mL水，超聲15分鐘，即得。

? ? ? ?3.8 含0.05%甲酸的5mmol/L乙酸銨溶液：稱取0.3854g乙酸銨（3.5），加入0.5mL甲酸（3.4），用水溶解并稀釋至1000mL，混勻。

? ? ? ?3.9 標準品：比馬前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素、曲伏前列素、他氟前列素的標準品，純度均≥98%。標準品的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質量、結構式詳見附錄A中的表A.1。

? ? ? ?3.10 標準儲備溶液：稱取比馬前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素、曲伏前列素、他氟前列素標準品各10mg（精確到0.00001g），分別置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并定容至刻度，搖勻。標準儲備溶液的質量濃度均為1000mg/L。置于-18℃冰箱中避光保存。

? ? ? ?3.11 混合標準儲備溶液：準確移取比馬前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素標準儲備溶液（3.10）和曲伏前列素、他氟前列素標準儲備溶液（3.10）適量，用50%乙腈溶液（3.3）配制得比馬前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素濃度為10mg/L、曲伏前列素、他氟前列素濃度為100mg/L的混合標準儲備溶液。置于-18℃冰箱中避光保存。

? ? ? ?4、儀器和設備

? ? ? ?4.1高效液相色譜-三重四*桿質譜聯用儀。

? ? ? ?4.2 分析天平：感量0.0001g和0.00001g。

? ? ? ?4.3 超聲波清洗器。

? ? ? ?4.4 渦旋混合儀。

? ? ? ?4.5 高速離心機。

? ? ? ?5、試樣制備與保存

? ? ? ?樣品應按照標簽標示的貯存條件進行保存。取樣前，應檢查封口的完整性，觀察樣品的性狀和特征，并使樣品混勻。打開包裝后，應盡可能快地取出所要測定部分進行分析，取樣后，應將樣品進行密封保存。

? ? ? ?6、分析步驟

? ? ? ?6.1篩查用混合標準溶液

? ? ? ?取混合標準儲備溶液（3.11）適量，用50%乙腈溶液（3.3）進行稀釋，配制成比馬前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素濃度為2.5μg/L，曲伏前列素、他氟前列素濃度為25μg/L的篩查用混合標準溶液。

? ? ? ?6.2空白基質提取液

稱取空白試樣0.2g（精確到0.0001g），置于50 mL離心管中，自“準確加入飽和氯化鈉溶液3mL”起與樣品同法處理（6.5），作為空白基質提取液。

? ? ? ?6.3基質混合標準中間溶液

準確量取混合標準儲備溶液（3.11）0.1mL，置于10mL棕色容量瓶中，用空白基質提取液（6.2）稀釋至刻度，搖勻，制成比馬前列素、他氟乙酰胺、拉坦前列素濃度為100μg/L、曲伏前列素、他氟前列素濃度為1000μg/L的基質混合標準中間溶液。

? ? ? ? 6.4基質混合標準系列溶液

分別精密量取基質混合標準中間溶液（6.3）適量，用空白基質提取液（6.2）配制得基質混合標準系列溶液，各組分濃度見表1。基質混合標準系列溶液應現用現配。

? ? ? ? 6.5樣品處理

稱取樣品0.2g（精確到0.0001g），置于50mL離心管中，加入飽和氯化鈉溶液（3.7）3mL，渦旋30s，分散均勻，準確加入乙腈（3.2）10mL，渦旋30s，超聲提取20min，靜置至室溫，以10000r/min轉速離心5min，準確吸取上清液5mL，加水定容至10mL，混勻，經0.22μm濾膜過濾后，濾液作為供試品溶液備用（供試品溶液可根據實際濃度進行適當稀釋）。

? ? ? ?6.6儀器參考條件

? ? ? ?6.6.1色譜條件

? ? ? ?色譜柱：C18柱（100 mm×2.1 mm，2.7μm），或等效色譜柱；

? ? ? ?流動相：A為含0.05%甲酸的5mmol/L乙酸銨溶液（3.8），B為乙腈（3.2）。梯度洗脫程序見表2；

? ? ? ?流速：0.3mL/min；

? ? ? ?柱溫：30℃；

? ? ? ?進樣量：5μL。

? ? ? ?6.6.2質譜條件

? ? ? ?離子源：電噴霧離子源（ESI源）；

監測模式：正離子多反應監測模式（MRM），監測離子對及相關參數設定見表3。

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? ? ? ?注：1.比馬前列素與他氟乙酰胺應有效分離、拉坦前列素與他氟前列素應有效分離。

? ? ? ? ? ? ? ?2.當采用不同質譜儀器時，儀器參數可能存在差異，測定前應將質譜參數優化到*佳。

? ? ? ?6.7定性判定

? ? ? ?取供試品溶液（6.5）與篩查用混合標準溶液（6.1）在相同分析條件下測定，樣品中如呈現定量離子對和定性離子對的色譜峰，被測成分的特征離子峰保留時間與篩查用混合標準溶液（6.1）對應的保留時間一致，且選擇的監測離子對的相對豐度比與相當濃度的篩查用混合標準溶液（6.1）的監測離子對的相對豐度比的*大偏差不超過表4的規定，則可以判定樣品中存在對應的組分。

? ? ? ?6.8定量測定

? ? ? ?取基質混合標準系列溶液（6.4）依次測定，以待測組分的系列濃度為橫坐標，待測組分的峰面積為縱坐標，進行線性回歸，繪制基質標準曲線，其線性相關系數應大于0.99。

取供試品溶液（6.5）測定，將對應的定量離子對色譜峰面積代入基質標準曲線。按“7”項下公式，計算樣品中待測組分的含量。

? ? ? ?6.9平行試驗

? ? ? ?按以上步驟，對同一樣品進行平行實驗測定。

? ? ? ?6.10空白試驗

? ? ? ? 除不加試樣外，均按上述測定條件和步驟進行。

? ? ? ? 7、結果計算

? ? ? ? 結果按式（1）計算：

? ? ? ? …………………………………………………(1)

? ? ? ? 式中：

? ? ? ? ω—樣品中比馬前列素等5種組分的質量分數，mg/kg；

? ? ? ? ρ—供試品溶液中比馬前列素等5種組分的質量濃度，μg/L；

? ? ? ? V—樣品定容體積，mL；

? ? ? ? m—樣品取樣量，g；

? ? ? ? D—稀釋倍數（如未稀釋則為1）。

? ? ? ? 在相同條件下獲得的兩次獨立測定結果的**差值不得超過算術平均值的10%。

? ? ? ?8、精密度和準確度

? ? ? ?多家實驗室驗證定量下限濃度回收率為80%～110%，相對標準偏差小于11%（n=6），中、高濃度回收率為90%～110%，相對標準偏差小于7.5%（n=6）。

? ? ? ?9、檢出限和定量限

? ? ? ?本方法中各組分的檢出限、定量下限及取樣量為0.2g時的檢出濃度和*低定量濃度見表5。

? ? ? ?起草單位：中國食品藥品檢定研究院,上海市食品藥品檢驗研究院

? ? ? ?主要起草人：王海燕、孫磊、王柯、鄭榮、潘晨、許勇、路勇

? ? ? ?驗證單位：廣東省藥品檢驗所、江西省藥品檢驗檢測研究院、浙江省食品藥品檢驗研究院