1.范圍

本標準規定了水果及蔬菜中阿維菌素檢測的制樣和液相色譜檢測方法。

本標準適用于蘋果及菠菜中阿維菌素殘留量的檢測。其它食品可參照執行。

2.規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其*新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB 2763 食品安全國家標準食品中農藥*大殘留限量

GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法

3.方法提要

試樣中的阿維菌素用丙酮提取,經濃縮后,用SPE C18柱浄化,并用甲醇洗脫。洗脫液經濃縮、定容、過濾后,用配有紫外檢測器的高效液相色譜測定,外標法定量。

4.試劑和材料

除另有規定外,所有試劑均為分析純,水為符合GB/T 6682中規定的一級水。

4.1 試劑

4.1.1 丙酮(C3H60):色譜純。

4.1.2 甲醇(CH40):色譜純。

4.2 標準品

4.2.1 阿維菌素標準品(分子式C48H72014):純度≥96.0%。

4.3 標準溶液配制

4.3.1 阿維菌素標準儲備液:稱取0.1g(準確至0.0002g)阿維菌素標準品于100mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度配制成濃度為1.0mg/mL的標準儲備液。

4.3.2 阿維菌素標準工作液:根據需要移取適量的阿維菌素標準儲備液,用甲醇稀釋成適當濃度的標準。標準工作液需每周配制一次。

5.儀器和設備

5.1 高效液相色譜儀:配有紫外檢測器

5.2 分析天平:感量0.01g和0.0001g

5.3 組織搗碎機。

5.4 振蕩器。

5.5 旋轉蒸發器。

5.6 固相萃取柱:SPE C18。規格:60mg/3mL使用前用5mL甲醇和5mL水活化。

6.試樣制備與保存

6.1 試樣制備

將所取樣品縮分岀1kg,取樣部位按GB 2763附錄A執行,樣品經組織搗碎機搗碎,均分為兩份,裝入潔凈容器內,作為試樣密封并標明標記。

6.2 試樣保存

將試樣于-18℃以下保存。

在抽樣和制樣的操作過程中,應防止樣品受到污染或發生殘留物含量的變化。

7.分析步驟

7.1 提取

稱取試樣約20g(精確至0.1g)于100mL具塞錐形瓶中,加入50mL丙酮,于振蕩器上振蕩0.5h用布氏漏斗抽濾,用20mL×2丙酮洗滌錐形瓶及殘渣。合并丙酮提取液,于40℃水浴旋轉蒸發至約2mL。

7.2 凈化

將上述的濃縮提取液完全轉入SPEC18柱,再用5L水淋洗,去掉淋洗液。*后用5L甲醇洗脫,收集洗脫液,用氮氣吹至近干。準確加入1.0mL甲醇溶解殘渣,用0.45μm濾膜過濾,濾液供液相色譜測定。外標法定量。

7.3 測定

7.3.1 高效液相色譜參考條件:

a) 色譜柱:ODS-C18 反相柱,4.6mm×125mm;

b) 流動相:甲醇:水=(90+10,V/V);

c) 流速:1.0mL/min;

d) 檢測波長:245nm;

e) 柱溫:40℃;

f) 進樣量:20μL。

7.3.2 色譜測定

根據樣液中阿維菌素含量情況,選定峰高相近的標準工作液標準工作液和樣液中阿維菌素響應值均應在儀器檢測線性范圍內,標準工作液和樣液等體積參插進樣。在上述色譜條件下,阿維菌素保留時間約為5.3min。

標準色譜圖參見附錄A,標準品紫外光譜圖參見附錄B。

7.4 空白試驗

除不加試樣外,均按照上述測定步驟進行。

8.結果計算與表述

用色譜數據處理機,或按式(1)計算試樣中阿維菌素殘留量：

X=h·c·V/hs·m………(1)

式中:

X——試樣中阿維菌素殘留量,單位為毫克每千克(mg/kg);

h——樣液中阿維菌素峰高,單位為毫米(mm);

hs——標準工作液中阿維菌素峰高,單位為毫米(mm);

c——標準工作液中阿維菌素濃度,單位為毫克每升(mg/L);

V——樣液*終定容體積,單位為毫升(mL);

m——*終樣液代表的試樣量,單位為克(g)。

注:計算結果須扣除空白值,測定結果用平行測定的算術平均值表示,保留兩位有效數字。

9.精密度

9.1 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的**差值與其算術平均值的比值(百分率),應符合附錄C的要求。

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