1范圍

本標準規定了用氣相色譜法檢驗乳及乳制品中植物油的方法。

本標準適用于乳及乳制品中植物油的定性檢驗。

2.規范性引用文件

下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準,然而,鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件,其*新版本適用于本標準。

GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)

3.原理

樣品經過氫氧化鉀乙醇溶液皂化,用乙醚、石油醚萃取脂肪,通過蒸餾或蒸發去除溶劑,用正己烷萃取游離的甾醇,用氣相色譜分析。若所測樣品中含有β-谷甾醇,則確定其中含有植物油成分。

4.試劑與材料

所有的試劑如未注明規格,均為分析純;實驗用水如未注明,均應符合GB/T 6682的規定。

4.1 正己烷(C5H6):色譜純。

4.2 乙醇(C2H5OH):95%。

4.3 乙醚[(C2H5)2O]。

4.4 石油醚:沸程為30℃～60℃。

4.5 無水硫酸鈉(Na2SO4)。

4.6 氫氧化鉀溶液:500g/L。

稱取500g氫氧化鉀(KOH),溶解后轉移至1000mL容量瓶中,定容,混勻。

4.7 膽固醇和β-谷甾醇混和標準溶液:每毫升含各單組分甾醇為0.4mg。

分別精確稱取膽固醇和β-谷甾醇標準品10mg,用正己烷(4.1)溶解并定容到同一25mL容量瓶中。搖勻后,冷藏于冰箱中,有效期60d。

5.儀器和設備

實驗室常用儀器及以下各項。

5.1 氣相色譜儀:配備氫火焰離子化檢測器(FID)。

5.2 分析天平(感量0.01g)。

5.3 分析天平(感量0.1mg)。

5.4 旋轉蒸發器。

5.5 磨口錐形瓶:250mL,可以連接空氣冷凝管。

6.試樣制備

6.1 液態試樣

稱量20g樣品,精確至0.01g,置于磨口錐形瓶(5.5)中。

6.2 固態試樣

稱量1g～5g樣品,精確至0.01g,置于磨口錐形瓶(5.5)中,加入50℃溫水10mL溶解。

注:根據樣品中的脂肪含量調整稱取樣量,使試樣中脂肪含量不低于1g。

7.分析步驟

7.1 試液制備

上述盛有試樣(第6章)的磨口錐形瓶(5.5)中,加入25mL氫氧化鉀溶液(4.6)及25mL乙醇(4.2),搖勻,加入4粒～5粒玻璃珠,裝上冷凝管,85℃水浴回流皂化45min。皂化液冷卻至室溫后,轉入250mL分液漏斗中,用少量水洗錐形瓶(5.5),洗液并入皂化液中。

分液漏斗中加入25mL乙醚(4.3)和25mL石油醚(4.4),輕輕振搖約1min,靜止分層。水相再用25mL乙醚(4.3)分別萃取兩次,合并萃取液。多次用25mL水洗萃取液至pH為中性,經無水硫酸鈉(4.5)脫水,過濾,收集濾液于蒸餾瓶中。40℃左右,用旋轉蒸發器(5.4)將萃取液蒸至近干,用正己烷(4.1)溶解殘渣,轉移定容至10mL,用于氣相色譜儀(5.1)測定。

7.2 氣相色譜參考條件

氣相色譜柱:DB-5毛細管柱,30m×0.25mm×0.25μm;

檢測器溫度:325℃;

進樣口溫度:280℃;

柱溫:程序升溫,自200℃起,以15℃/min升溫至300℃,保持20min;

氮氣流速:1.0mL/min;

氫氣流速:30mL/min;

空氣流速:300mL/min;

分流比:5:1;

進樣量:2μL。

7.3 測定

準確吸取2μL膽固醇和β-谷甾醇的混合標準工作液(4.7),注入氣相色譜儀(5.1)。在上述色譜條件下,出峰順序依次為膽固醇和β-谷甾醇,標準溶液的氣相色譜圖參見圖A.1。

準確吸取不少于兩份的2μL試液(7.1),分別注入氣相色譜儀(5.1)。

8.結果表述

膽固醇為動物脂肪的特征組分。若色譜圖中出現β-谷甾醇色譜峰,則表明所測試樣中含有植物油成分。

9.靈敏度

樣品中脂肪的膽固醇檢出限為0.5mg/kg,β-谷甾醇的檢出限為1mg/kg。

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下載地址：《GB/T 22035-2008 乳及乳制品中植物油的檢驗 氣相色譜法》