1.范圍

GB/T 18932的本部分規(guī)定了蜂蜜中苯酚殘留量液相色譜測定方法。

本部分適用于蜂蜜中苯酚殘留量的測定。

本部分苯酚的方法檢出限為0.025mg/kg。

2.規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過GB/T 18932的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容或修訂版均不適用于本部分,然而,鼓勵(lì)根據(jù)本部分達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件,其*新版本適用于本部分。

GB/T 6379-1986 測試方法的精密度 通過實(shí)驗(yàn)室間試驗(yàn)確定標(biāo)準(zhǔn)測試方法的重復(fù)性和再現(xiàn)性(neq ISO 5725:1981)

GB/T 6682-1992 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法(neq ISO 3696:1987)

3.原理

試樣中所含的苯酚使用磷酸蒸出,用苯和氫氧化鈉溶液萃取后,經(jīng)C18固相萃取柱凈化。用配有紫外檢測器高效液相色譜儀測定,外標(biāo)法定量。

4.試劑和材料

除另有說明外,所用試劑均為優(yōu)級(jí)純,水為GB/T 6682—1992規(guī)定的一級(jí)水。

4.1 甲醇:一級(jí)色譜純。

4.2 苯:一級(jí)色譜純并經(jīng)過提純。取200mL苯以2×150mL0.1mo/L氫氧化鈉溶液提取兩次。

4.3 乙腈:一級(jí)色譜純。

4.4 磷酸。

4.5 氯化鈉。

4.6 氫氧化鈉。

4.7 碳酸氫鈉。

4.8 磷酸溶液(1+9):取10mL磷酸(4.4)加水稀釋至100mL。

4.9 氫氧化鈉溶液:0.1mol/L。稱取20g氫氧化鈉(4.6)加水溶解,稀釋至500mL。

4.10 碳酸氫鈉溶液:10g/L。稱取1.0g碳酸氫鈉(4.7)加水溶解,稀釋至100mL。

4.11 碳酸氫鈉溶液:50g/L。稱取5.0g碳酸氫鈉加水溶解,稀釋至100mL。

4.12 甲醇十水(1+1)。

4.13 苯酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):純度≥99%。

4.14 苯酚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:準(zhǔn)確稱取適量的苯酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(4.13),用甲醇(4.1)配制成濃度為0.10mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

4.15 苯酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液·根據(jù)需要用甲醇溶液(4.12)稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

4.16 C18固相萃取柱:使用前分別用3mL甲醇及6mL水洗滌,使之保持濕潤。選用不同批次的C18固相萃取柱時(shí),需作洗脫條件試驗(yàn)。

5.儀器

5.1 高效液相色譜儀:配有紫外檢測器。

5.2 振蕩器。

5.3 空氣泵。

5.4 玻璃蒸餾裝置:配有500mL平底蒸餾燒瓶及加熱裝置。

5.5 微量注射器100μL。

6.試樣制備與保存

6.1 試樣的制備

對(duì)無結(jié)晶的實(shí)驗(yàn)室樣品,將其攪拌均勻。對(duì)有結(jié)晶的樣品,在密閉情況下,置于不超過60℃的水浴中溫?zé)?振蕩,待樣品全部融化后攪勻,迅速冷卻至室溫。分出0.5kg作為試樣。制備好的試樣置于樣品瓶中,密封,并標(biāo)明標(biāo)記。

6.2 試樣的保存

將試樣于常溫下保存。

7.分析步驟

7.1 蒸餾

稱取20g試樣,精確到0.01g,置于500mL平底燒瓶中,加入90mL水,使試樣完全溶解。然后依次加入25g氯化鈉(4.5),2mL磷酸溶液(4.8)和幾個(gè)素瓷片。開始加熱蒸餾,收集前30mL餾分。

7.2 凈化

準(zhǔn)確移取15mL餾分(7.1)于60mL分液漏斗中,加入5mL碳酸氫鈉溶液(4.11),混勻后加入6g氯化鈉,使之溶解。然后用2×5mL苯(4.2)提取兩次,收集苯相。用3mL碳酸氫鈉溶液(4.10)洗滌苯相,棄去水相。再分別用2×4mL氫氧化鈉溶液(4.9)提取苯酚兩次,收集氫氧化鈉溶液,用磷酸(4.4)調(diào)節(jié)酸度至pH=3,加入2.5g氯化鈉。

將上述溶液以約2.0mL/min的流速通過經(jīng)預(yù)處理的C18固相萃取柱(4.16),待溶液全部流出后,用0.5mL水洗滌小柱,抽干5min,然后用0.5mL甲醇洗脫,收集洗脫液并用水定容至1mL,搖勻后,供液相色譜儀測定。

7.3測定

7.3.1 液相色譜條件

a) 色譜柱: Hypersil 5μm C18,150mm×4.6mm(內(nèi)徑)或相當(dāng)者;

b) 流動(dòng)相:乙腈十水(18+82);

c )流速10mL/min;

d) 檢測波長:195nm;

e) 進(jìn)樣量.80μL。

7.3.2 液相色譜測定

根據(jù)試樣測定液中苯酚含量情況,選定峰高相近的苯酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣測定液中苯酚的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測定的線性范圍內(nèi)。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣測定液等體積參插進(jìn)樣測定。在上述色譜條件下,苯酚的參考保留時(shí)間為10.96min。

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