1.范圍

本標準規定了嬰幼兒食品和乳品中維生素C的測定方法。

本標準適用于嬰幼兒食品和乳品中維生素C的測定。本標準測定的是還原型維生素C和氧化型維生素C的總量。

2.規范性引用文件

本標準中引用的文件對于本標準的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本標準。凡是不注日期的引用文件,其*新版本(包括所有的修改單)適用于本標準。

3.原理

維生素C(抗壞血酸)在活性炭存在下氧化成脫氫抗壞血酸,它與鄰苯二胺反應生成熒光物質,用熒光分光光度計測定其熒光強度,其熒光強度與維生素C的濃度成正比,以外標法定量。

4.試劑和材料

除非另有規定,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規定的三級水。

4.1 淀粉酶:酶活力1.5U/mg,根據活力單位大小調整用量。

4.2 偏磷酸—乙酸溶液A:稱取15g偏磷酸及40mL乙酸(36%)于200m水中,溶解后稀釋至500mL備用。

4.3 偏磷酸—乙酸溶液B:稱取15g偏磷酸及40mL乙酸(36%)于100mL水中,溶解后稀釋至250mL備用。

4.4 酸性活性炭:稱取粉狀活性炭(化學純,80目～200目)約200g,加入1L體積分數為10%的鹽酸,加熱至沸騰,真空過濾,取下結塊于一個大燒杯中,用水清洗至濾液中無鐵離子為止,在110℃～120℃烘箱(5.3)中干燥約10h后使用。

檢驗鐵離子的方法:普魯士藍反應。將20g/L亞鐵氰化鉀與體積分數為1%的鹽酸等量混合,將上述洗出濾液滴入,如有鐵離子則產生藍色沉淀。

4.5 乙酸鈉溶液:用水溶解500g三水乙酸鈉,并稀釋至1L。

4.6 硼酸—乙酸鈉溶液:稱取3.0g硼酸,用乙酸鈉溶液(4.5)溶解并稀釋至100mL,臨用前配制。

4.7 鄰苯二胺溶液(400mg/L):稱取40mg鄰苯二胺,用水溶解并稀釋至100mL,臨用前配制。

4.8 維生素C標準溶液(100μg/mL):稱取0.050g維生素C標準品,用偏磷酸乙酸溶液A(4.2)溶解并定容至50mL,再準確吸取10.onL該溶液用偏磷酸—乙酸溶液A(4.2)稀釋并定容至100mL,臨用前配制。

5.儀器和設備

5.1 熒光分光光度計。

5.2 天平:感量為0.1mg。

5.3 烘箱:溫度可調。

5.4 培養箱:45℃±1℃。

6.分析步驟

6.1 試樣處理

6.1.1 含淀粉的試樣:稱取約5g(精確至0.0001g)混合均勻的固體試樣或約20g(精確至0.0001g)液體試樣(含維生素C約2mg)于150mL三角瓶中,加入0.1g淀粉酶(4.1),固體試樣加入50mL45℃～50℃的蒸餾水,液體試樣加入30mL45℃～50℃的蒸餾水,混合均勻后,用氮氣排除瓶中空氣,

蓋上瓶塞,置于45℃±1℃培養箱(5.4)內30min,取岀冷卻至室溫,用偏磷酸—乙酸溶液B(4.3)轉至100mL容量瓶中定容。

6.1.2 不含淀粉的試樣:稱取混合均勻的固體試樣約5g(精確至0.0001g,用偏磷酸—乙酸溶液A(4.2)溶解,定容至100mL。或稱取混合均勻的液體試樣約50g(精確至0.0001g),用偏磷酸—乙酸溶液B(4.3)溶解,定容至100mL。

6.2 待測液的制備

6.2.1 將上述試樣(6.1.1,6.1.2)及維生素C標準溶液(4.8)轉至放有約2g酸性活性炭(4.4)的250mL三角瓶中,劇烈振動,過濾(棄去約5mL*初濾液),即為試樣及標準溶液的濾液。然后準確吸取50mL試樣及標準溶液的濾液分別置于25mL及50mL放有5.0mL硼酸—乙酸鈉溶液(4.6)的容量瓶中,靜置30min后,用蒸餾水定容。以此作為試樣及標準溶液的空白溶液。

6.2.2 在此30min內,再準確吸取5.0mL試樣及標準溶液的濾液于另外的25mL及50mL放有5.0mL乙酸鈉溶液(4.5)和約15mL水的容量瓶中,用水稀釋至刻度。以此作為試樣溶液及標準溶液。

6.2.3 試樣待測液:分別準確吸取2.0mL試樣溶液(6.2.2)及試樣的空白溶液(6.2.1)于10.0mL試管中,向每支試管中準確加入5.0mL鄰苯二胺溶液(4.7),搖勻,在避光條件下放置60min后待測。

6.2.4 標準系列待測液:準確吸取上述標準溶液(6.2.2)0.5mL、1.0mL、1.5mL和2.0mL,分別置于10mL試管中,再用水補充至2.0mL。同時準確吸取標準溶液的空白溶液(6.2.1)2.0mL于10mL試管中。向每支試管中準確加入5.0mL鄰苯二胺溶液(4.7),搖勻,在避光條件下放置60min后待測。

6.3 測定

6.3.1 標準曲線的繪制

將標準系列待測液(6.2.4)立刻移入熒光分光光度計的石英杯中,于激發波長350nm,發射波長430nm條件下測定其熒光值。以標準系列熒光值分別減去標準空白熒光值為縱坐標,對應的維生素C質量濃度為橫坐標,繪制標準曲線。

6.3.2 試樣待測液的測定

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