1 范圍

本標準規定了辣椒素的高效液相色譜測定方法。

本標準適用于辣椒及以其為原料生產食品中的辣椒素、二氫辣椒素含量的測定。

本方法的檢出限辣椒素為0.13mg/kg，二氫辣椒素為0.04mg/kg。

本方法的線性范圍辣椒素為0.10mg/L~160mg/L，二氫辣椒素為0.04mg/L~160mg/L。

2 規范性引用文件

下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件，其*新版本適用于本標準。

GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法

3 原理

試樣經甲醇四氫呋喃溶液提取，過微孔濾膜，進樣，用反相色譜分離，熒光檢測器檢測，外標法定量。

4 試劑和材料

除非另有規定，僅使用色譜純試劑，實驗用水應符合GB/T 6682 一級水的要求。

4.1 甲醇(CH3OH)

4.2 四氫呋喃(C4H80)。

4.3 甲醇四氫呋喃溶液(1+1)：取200mL甲醇和200mL四氫呋喃混合均勻備用。

4.4 無水硫酸鈉(NaSO4)，分析純，用前400℃烘干30min，磨碎。

4.5 辣椒素標準品，純度大于95%。

4.6 二氫辣椒素標準品，純度大于90%。

4.7 辣椒素標準儲備液稱取0.0100g辣椒素標準品，用甲醇溶解，定容至50mL，辣椒素質量濃度為200mg/L。

4.8 二氫辣椒素標準儲備液：稱取0.0100g二氫辣椒素標準品，用甲醇溶解，定容至50mL，二氫辣椒素質量濃度為200mg/L。

5 儀器和設備

5.1 高效液相色譜儀：帶熒光檢測器。

5.2 天平：感量±0.001g、±0.01g

5.3 超聲波提取器。

5.4 組織搗碎機。

5.5 電動磨碎機。

5.6 恒溫水浴鍋。

5.7 濾膜：0.45μm，有機相。

6 分析步驟

6.1 提取

6.1.1 辣椒粉、干辣椒及固態辣椒制品

將樣品用電動磨碎機磨碎，稱取0.2g精確到0.0001g，于100mL具塞錐形瓶中，加入25mL甲醇四氫呋喃溶液，在60℃水浴條件下，用超聲波提取器提取30min，過濾，收集濾液。將濾渣連同濾紙重新用25mL甲醇四氫呋喃溶液經超聲波提取器提取10min后，再重復一次。將三次過濾收集的濾液合并，在70℃~75℃恒溫水浴下濃縮至30mL左右，轉移至50mL容量瓶，用甲醇-四氫呋喃溶液定容。經0.45μm有機相濾膜過濾后進行色譜分析。根據試樣中的辣椒素含量，必要時進行稀釋，使試樣中辣椒素含量在0.13mg/L~160mg/L之間，二氫辣椒素含量在0.04mg/L~160mg/L范圍內。

6.1.2 鯡辣椒、辣椒醬及含水量較高的辣椒制品

將樣品用組織搗碎機搗碎，稱取10.00g樣品于100mL具塞錐形瓶中，加人3.0g無水硫酸鈉，25mL甲醇四氫呋喃溶液，震搖，用超聲波提取器提取30min，過濾，收集濾液。以后同6.1.1“將濾渣連同濾紙重新…”操作。

6.1.3 辣椒油等油狀制品

將樣品用組織搗碎機均質，稱取2.00g樣品于100mL具塞錐形瓶中，加入25mL甲醇四氫呋喃溶液，用超聲波提取器提取30min，過濾，收集濾液。以后同6.1.1“將濾渣連同濾紙重新…”操作。

6.2 色譜參考條件

色譜柱：C18 150mm×4.6mm，粒徑5μm。

流動相：甲醇+水=80+20，用前過0.45m濾膜，脫氣。

流速：0.6mL/min。

熒光檢測器激發波長229nm，發射波長320mm。

進樣量10μL。

6.3 標準曲線的繪制

將辣椒素、二氫辣椒素標準儲備液分別用甲醇稀釋成質量濃度為0.2mg/L1mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mgL和160mg/L系列標準工作溶液，按6.2色譜條件測定。以辣椒素、二氫辣椒素質量濃度為縱坐標，相應的峰面積積分值為橫坐標，計算標準曲線或求線性回歸方程。

6.4 試液的測定

將制備好的試液在6.2色譜條件下測定，做單點或多點校準，以峰面積積分值定量。

7 結果計算與表述

試樣中辣椒素、二氫辣椒素含量以質量分數v計，單位以毫克每千克(mg/kg)表示，按公式(1)計算：

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