1.范圍

本標準規定了食品中霉菌和酵母( moulds and yeasts)的計數方法。

本標準**法適用于各類食品中霉菌和酵母的計數,第二法適用于番茄醬罐頭、番茄汁中霉菌的計數。

2.設備和材料

除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下：

2.1 培養箱:28℃±1℃。

2.2 拍擊式均質器及均質袋。

2.3 電子天平:感量0.1g。

2.4 無菌錐形瓶:容量500mL。

2.5 無菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)。

2.6 無菌試管:18mm×180mm。

2.7 旋渦混合器。

2.8 無菌平皿:直徑90mm。

2.9 恒溫水浴箱:46℃±1℃。

2.10 顯微鏡:10倍～100倍。

2.11 微量移液器及槍頭:1.0mL。

2.12 折光儀。

2.13 郝氏計測玻片:具有標準計測室的特制玻片。

2.14 蓋玻片。

2.15 測微器:具標準刻度的玻片。

3.培養基和試劑

3.1 生理鹽水:見A.1。

3.2 馬鈴薯葡萄糖瓊脂:見A.2。

3.3 孟加拉紅瓊脂:見A.3。

3.4 磷酸鹽緩沖液:見A.4。

**法 霉菌和酵母平板計數法

4.檢驗程序

霉菌和酵母平板計數法的檢驗程序見圖1

5.操作步驟

5.1 樣品的稀釋

5.1.1 固體和半固體樣品:稱取25g樣品,加入225mL無菌稀釋液(蒸餾水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液),充分振搖,或用拍擊式均質器拍打1min～2min,制成1:10的樣品勻液。

5.1.2 液體樣品:以無菌吸管吸取25mL樣品至盛有225mL無菌稀釋液(蒸餾水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液)的適宜容器內(可在瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠)或無菌均質袋中,充分振搖或用拍擊式均質器拍打1min～2min,制成1:10的樣品勻液。

5.1.3 取1mL 1:10樣品勻液注入含有9mL無菌稀釋液的試管中,另換一支1mL無菌吸管反復吹吸,或在旋渦混合器上混勻,此液為1:100的樣品勻液。

5.1.4 按5.1.3操作,制備10倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞増增稀釋一次,換用1支1mL無菌吸管。

5.1.5 根據對樣品污染狀況的估計,選擇2個～3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),在進行10倍遞增稀釋的同時,每個稀釋度分別吸取1mL樣品勻液于2個無菌平皿內。同時分別取1mI無菌稀釋液加入2個無菌平皿作空白對照。

5.1.6 及時將20mL～25mL冷卻至46℃的馬鈴薯葡萄糖瓊脂或孟加拉紅瓊脂(可放置于46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿,并轉動平皿使其混合均勻。置水平臺面待培養基完全凝固。

5.2 培養

瓊脂凝固后,正置平板,置28℃±1℃培養箱中培養,觀察并記錄培養至第5d的結果。

5.3 菌落計數

用肉眼觀察,必要時可用放大鏡或低倍鏡,記錄稀釋倍數和相應的霉菌和酵母菌落數。以菌落形成單位( colony- forming units,CFU)表示。

選取菌落數在10CFU～150CFU的平板,根據菌落形態分別計數霉菌和酵母。霉菌蔓延生長覆蓋整個平板的可記錄為菌落蔓延。

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下載地址：《GB 4789.15-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 霉菌和酵母計數》