1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌( Yersinia enterocolitica)的檢驗(yàn)方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的檢驗(yàn)。

2.設(shè)備和材料

除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下：

2.1 冰箱:0℃～4℃

2.2 恒溫培養(yǎng)箱:26℃±1℃、36℃±1℃。

2.3 顯微鏡:10倍～100倍。

2.4 均質(zhì)器。

2.5 天平:感量0.1g。

2.6 滅菌試管:16mm×160mm、15mm×100mm。

2.7 滅菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)。

2.8 錐形瓶:200mL、500mL

2.9 滅菌平皿:直徑90mm。

2.10 微生物生化鑒定試劑盒或微生物生化鑒定系統(tǒng)。

3.培養(yǎng)基和試劑

3.1 改良磷酸鹽緩沖液:見(jiàn)A.1。

3.2 CIN-1培養(yǎng)基( Cepulodin Irgasan Novobiocin Agar):見(jiàn)A.2。

3.3 改良Y培養(yǎng)基( Agar Y, Modified):見(jiàn)A.3。

3.4 改良克氏雙糖培養(yǎng)基:見(jiàn)A.4。

3.5 糖發(fā)酵管:見(jiàn)A.5。

3.6 鳥(niǎo)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基:見(jiàn)A.6。

3.7 半固體瓊脂:見(jiàn)A.7。

3.8 緩沖葡萄糖蛋白胨水[甲基紅(MR)和VP試驗(yàn)用]:見(jiàn)A.8。

3.9 堿處理液:見(jiàn)A.9。

3.10 尿素培養(yǎng)基:見(jiàn)A.10。

3.11 營(yíng)養(yǎng)瓊脂:見(jiàn)A.11。

3.12 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌診斷血清。

4.檢驗(yàn)程序

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖1

5.操作步驟

5.1 增菌

以無(wú)菌操作取25g(或25mL)樣品放人含有225mL改良磷酸鹽緩沖液增菌液的無(wú)菌均質(zhì)杯或均質(zhì)袋內(nèi),以8000r/min均質(zhì)lmin或拍擊式均質(zhì)器均質(zhì)1min。液體樣品或粉末狀樣品,應(yīng)振蕩混勻均質(zhì)后于26℃±1℃增菌48h～η2h。增菌時(shí)間長(zhǎng)短可根據(jù)對(duì)樣品污染程度的估計(jì)來(lái)確定。

5.2 堿處理

除乳與乳制品外,其他食品的增菌液0.5mL與堿處理液4.5mL充分混合15s。

5.3 分離

將乳與乳制品增菌液或經(jīng)過(guò)堿處理的其他食品増菌液分別接種于CIN-Ⅰ瓊脂平板和改良Y瓊脂平板,26℃士1℃培養(yǎng)48h±2h。典型菌落在CIN-1上為深紅色中心,周圍具有無(wú)色透明圈(紅色牛眼狀菌落),菌落大小為Ⅰmm～2mm,在改良Y瓊脂平板上為無(wú)色透明、不黏稠的菌落。

5.4 改良克氏雙糖試驗(yàn)

分別挑取5.3中的可疑菌落3個(gè)～5個(gè),分別接種于改良克氏雙糖鐵瓊脂,接種時(shí)先在斜面劃線,再于底層穿刺,26℃±1℃培養(yǎng)24h,將斜面和底部皆變黃且不產(chǎn)氣的培養(yǎng)物做進(jìn)一步的生化鑒定。

5.5 尿素酶試驗(yàn)和動(dòng)力觀察

用接種環(huán)挑取一滿環(huán)5.4得到的可疑培養(yǎng)物,接種到尿素培養(yǎng)基中,接種量應(yīng)足夠大,振搖幾秒鐘,26℃士1℃培養(yǎng)2h～4h。將尿素酶試驗(yàn)陽(yáng)性菌落分別接種于兩管半固體培養(yǎng)基中,于26℃±1℃和36℃士1℃培養(yǎng)24h。將在26℃有動(dòng)力而36℃無(wú)動(dòng)力的可疑菌培養(yǎng)物劃線接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板,進(jìn)行純化培養(yǎng),用純化物進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢和生化試驗(yàn)。

5.6 革蘭氏染色鏡檢

將純化的可疑菌進(jìn)行革蘭染色。小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌呈革蘭氏陰性球桿菌,有時(shí)呈橢圓或桿狀,大小為(0.8μm～3.0μm)×0.81μm

5.7 生化鑒定

5.7.1 從5.5中的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取單個(gè)菌落接種生化反應(yīng)管,生化反應(yīng)在26℃士1℃進(jìn)行。小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的主要生化特征以及與其他相似菌的區(qū)別見(jiàn)表1。

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