1.范圍

本標準規定了食品中菌落總數( Aerobic plate count)的測定方法。

本標準適用于食品中菌落總數的測定

2.術語和定義

菌落總數 aerobic plate count

食品檢樣經過處理,在一定條件下(如培養基、培養溫度和培養時間等)培養后,所得每g(mL)檢樣中形成的微生物菌落總數。

3.設備和材料

除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下：

3.1 恒溫培養箱:36℃±1℃,30℃±1℃

3.2 冰箱:2℃～5℃

3.3 恒溫水浴箱:46℃±1℃。

3.4 天平:感量為0.1g。

3.5 均質器。

3.6 振蕩器。

3.7 無菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭。

3.8 無菌錐形瓶:容量250mL、500mI。

3.9 無菌培養皿:直徑90mm。

3.10 pH計或pH比色管或精密pH試紙。

3.11 放大鏡或/和菌落計數器。

4.培養基和試劑

4.1 平板計數瓊脂培養基:見A.1。

4.2 磷酸鹽緩沖液:見A.2。

4.3 無菌生理鹽水:見A.3。

5.檢驗程序

菌落總數的檢驗程序見圖1

6.操作步驟

6.1 樣品的稀釋

6.1. 1 固體和半固體樣品:稱取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內,8000r/min~10000r/min均質1min~2min,或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質袋中,用拍擊式均質器拍打1min~2min,制成1:10的樣品勻液。

6.1.2 液體樣品:以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠)中,充分混勻,制成1:10的樣品勻液。

6.1.3 用lmL無菌吸管或微量移液器吸取Ⅰ:10樣品勻液ⅠmL,沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭**不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻,制成1:100的樣品勻液。

6.1.4 按6.1.3操作,制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次,換用1次1mL無菌吸管或吸頭。

6.1.5 根據對樣品污染狀況的估計,選擇2個~3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),在進行10倍遞增稀釋時,吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內,每個稀釋度做兩個平皿。同時,分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對照。

6.1.6 及時將15mL～20mL冷卻至46℃的平板計數瓊脂培養基(可放置于46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿,并轉動平皿使其混合均勻。

6.2 培養

6.2.1 待瓊脂凝固后,將平板翻轉,36℃±1培養48h±2h。水產品30℃±1℃培養72h±3h。

6.2.2 如果樣品中可能含有在瓊脂培養基表面彌漫生長的菌落時,可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養基(約4mL),凝固后翻轉平板,按6.2.1條件進行培養。

6.3 菌落計數

6.3.1 可用肉眼觀察,必要時用放大鏡或菌落計數器,記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位( colony- forming units,CFU)表示。

6.3.2 選取菌落數在30CFU～300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低于30CFU的平板記錄具體菌落數,大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數。

6.3.3 其中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數;若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計算半個平板后乘以2,代表一個平板菌落數。

6.3.4 當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長時,則將每條單鏈作為一個菌落計數。

7.結果與報告

7.1 菌落總數的計算方法

7.1.1 若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內,計算兩個平板菌落數的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數,作為每g(mL)樣品中菌落總數結果。

7.1.2 若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時,按式(1)計算:

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下載地址：《GB 4789.2-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》