1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了新鮮水果中有機(jī)酸(檸檬酸、蘋(píng)果酸、酒石酸和琥珀酸)含量的離子色譜測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于新鮮水果中有機(jī)酸(檸檬酸、蘋(píng)果酸、酒石酸和琥珀酸)含量的測(cè)定。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其*新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T 8855 新鮮水果和蔬菜取樣方法

3 原理

試樣經(jīng)乙醇溶液超聲提取過(guò)濾后，用離子色譜柱進(jìn)行分離，用離子色譜儀一電導(dǎo)檢測(cè)器測(cè)定，以保留時(shí)間定性，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法定量。

4 試劑和材料

除非另有說(shuō)明在分析中僅使用優(yōu)級(jí)純或以上試劑，實(shí)驗(yàn)用水符合GB/T 6682 的一級(jí)水指標(biāo)。

4.1 試劑的配制

4.1.1 無(wú)水乙醇(C2H6O)。

4.1.2 硫酸(H2SO4)。

4.1.3 乙醇溶液(1+9)：量取100mL無(wú)水乙醇與900mL水混勻。

4.1.4 硫酸溶液Ⅰ(0.5mol/L)：準(zhǔn)確吸取13.6mL硫酸，緩緩注入事先加有200mL水的燒杯中，混勻并冷卻后轉(zhuǎn)移到500mL容量瓶中，用水定容。

4.1.5 硫酸溶液Ⅱ(0.005mol/L)：準(zhǔn)確吸取0.5mol/L硫酸溶液Ⅰ(4.1.4)10mL于1000mL容量瓶中，用水稀釋?zhuān)盟ㄈ荨?/p>

4.1.6 氯化鋰溶液(0.lmol/L)：稱(chēng)取2.12g氯化鋰于50mL燒杯中，用水溶解，轉(zhuǎn)移到500mL容量瓶中，用水定容。

4.2 標(biāo)準(zhǔn)品

4.2.1 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥9.0%)。

4.2.2 蘋(píng)果酸標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99.0%)。

4.2.3 酒石酸標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99.0%)。

4.2.4 琥珀酸標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99.0%)。

4.3 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

4.3.1 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(4.00g/L)：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.4000g檸檬酸(干燥器中干燥24h)于100mL燒杯中，用水溶解，轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，用水定容。在0℃~5℃下保存，有效期3個(gè)月。

4.3.2 蘋(píng)果酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(2.00g/L)：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.2000g蘋(píng)果酸(干燥器中干燥24h)于100mL燒杯中，用水溶解，轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，用水定容。在0℃~5℃下保存，有效期3個(gè)月。

4.3.3 酒石酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(2.00g/L)：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.2000g酒石酸(干燥器中于燥24h)于100mL燒杯中，用水溶解，轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中，用水定容。在0℃~5℃下保存，有效期3個(gè)月。

4.3.4 琥珀酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.00g/L)：準(zhǔn)確稱(chēng)取琥珀酸0.1000g(干燥器中干燥24h)于100mL燒杯中，用水溶解，轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，用水定容。在0℃~5℃下保存，有效期3個(gè)月。

4.4 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取0.00mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(4.3)，于50mL容量瓶中，用乙醇溶液(4.1.3)稀釋定容，即得有機(jī)酸混合系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液檸檬酸質(zhì)量濃度分別為0.00g/L、0.08g/L、0.16g/L、0.24g/L、0.32g/L、0.40g/L，蘋(píng)果酸和酒石酸質(zhì)量濃度分別為0.00g/L、0.04g/L、0.06g/L、0，12g/L、0.16g/L、0.20g/L，琥珀酸質(zhì)量濃度分別為0.00g/L、0.02g/L、0.04g/、0.06g/L、0.08g/L、0.10g/L。

5 儀器和設(shè)備

5.1 離子色譜儀：配電導(dǎo)檢測(cè)器。

5.2 分析天平：感量±0.01g、±0.001g和±0.0001g。

5.3 組織搗碎機(jī)

5.4 超聲波提取器。

5.5 溶劑過(guò)濾器：0.45μm水性濾膜。

5.6 針頭過(guò)濾器：0.22μm水性濾膜。

6 分析步驟

6.1 試樣制備

按照GB/T 8855 的規(guī)定抽取水果樣品，取可食部分，經(jīng)縮分后，將其切碎，充分混勻后放入組織搗碎機(jī)中制成勻漿。將勻漿后的試樣取500g裝入樣品瓶中冷凍保存。

6.2 提取和凈化

稱(chēng)取試樣2.0g~5.0g(精確至0.001g)于150m三角瓶中，加入約80m乙醇溶液(4.1.3)，搖勻后置超聲波提取器中提取30min，然后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用乙醇溶液(4.1.3)定容，過(guò)0.22μm水性濾膜針頭過(guò)濾器，供離子色譜分析用。

6.3 儀器參考條件

6.3.1 離子色譜柱： ICSep COREGEL-64H，7.8mm×300mm，或其他性能相當(dāng)?shù)纳V柱。

6.3.2 柱溫：65℃。

6.3.3 流速：0.60mL/min。

6.3.4 進(jìn)樣體積：20μL。

6.3.5 淋洗液：硫酸溶液Ⅱ(4.1.5)，臨用前過(guò)溶劑過(guò)濾器。

6.3.6 抑制器再生液：濃度為0.1mol/L的氯化鋰溶液(4.1.6)，臨用前過(guò)溶劑過(guò)濾器。

6.4 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)

將有機(jī)酸混合系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(4.4)經(jīng)0.2μm水性濾膜針頭過(guò)濾器過(guò)濾后按6.3進(jìn)行測(cè)定。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰髙或峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖參見(jiàn)附錄A。

6.5 測(cè)定

在相同工作條件下以保留時(shí)間定性，以峰高或峰面積比較定量。試樣溶液中檸檬酸、酒石酸、蘋(píng)果酸和琥珀酸峰髙或峰面積超過(guò)冇機(jī)酸混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液*髙點(diǎn)時(shí)，則將待測(cè)液稀釋后重新測(cè)定。

6.6 空白試驗(yàn)

除不加試樣外，其他步驟同試樣操作步驟進(jìn)行。

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