黃曲霉毒素M1和鉛是乳品質量安全中重要的安全指標，也是生鮮乳質量安全監管和風險評估研究中重點關注的風險因子，檢測數據的準確性和科學性直接影響對牛乳的品質和安全性的判定和評估。能力驗證是利用實驗室間比對來確定實驗室能力的活動，也是為確保實驗室維持較高的校準和檢測水平而對其能力進行考核、監督和確認的一種驗證活動，通過能力驗證活動可以檢驗實驗室檢檢測水平和能力，是評價、判斷、監控和提升實驗室能力的有效手段之一。

一、牛乳中黃曲霉毒素M1的測定

1.奶產品中黃曲霉毒素M1的限量我國GB 2761-2011 《食品安全國家標準 食品中真菌毒素的限量》中明確規定牛乳中黃曲霉毒素M1的限量為0.5μg/kg，與美國、日本一致，歐盟成員國以及與歐盟有貿易部分國家相對嚴格，為0.05μg/kg，而歐盟對嬰幼兒配方食品，包括嬰幼兒配方牛奶則限量0.025μg/kg。

2.黃曲霉毒素M1的檢測方法 目前現有黃曲霉毒素M1檢測方法有薄層色譜法、酶聯免疫法、熒光光度法、液相色譜法、液質聯用法等。我國現行有效的標準有GB 5413.37-2010《食品安全國家標準 乳和乳制品中黃曲霉毒素M1的測定》、GB 5009.24-2010《食品安全國家標準 食品中黃曲霉毒素M1和B1的測定》、GB/T 23212-2008《牛奶和奶粉中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的測定 液相色譜-熒光檢測法》、SN/T 1664-2005 《牛奶和奶粉中黃曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2含量的測定》等。牛乳中黃曲霉毒素M1的測定主要推薦使用GB 5413.37-2010中的**法(液質聯用免疫親和層析凈化法)和第二法(高效液相色譜免疫親和層析凈化法)。這兩種方法都適用，但從日常檢測經驗來看，液相法定量方面優于液質法，且操作相對簡單、儀器普及率高，牛乳中黃曲霉毒素M1的測定推薦使用第二法。

3.液相色譜免疫親和柱凈化法1)樣品前處理

A準確稱樣:牛乳取50 mL(g)以上,奶粉稱取10 g左右，取樣量一定按照標準要求操作。

B復原：奶粉需用50℃溫水50 mL復溶，完全溶解，不能有結塊，冷卻至室溫后定容至100 mL。

C離心去脂：樣液在4 ℃下以10000轉/min轉速下冷凍離心15 min，完全去除脂肪，吸取清液，操作過程中不得混入脂肪。

D凈化、濃縮：應注意冷藏保存的免疫親和柱需恢復至室溫，并檢查柱效，柱效應大于80 %，且上樣過程中免疫親和柱不能流干;流速一般控制在2-3mL/min;水洗后需抽干，用3mL甲醇洗脫收集，氮氣吹至近干，用10%乙腈水溶液定容至1mL。

2)色譜條件

色譜柱： C18 4.6×150mm,3.5-5Micron 。

流動相：乙腈-水(25：75)

流速： 0.8ml/min 。

進樣量：30.0 uL。

柱溫：25℃。

檢測器：熒光檢測器;

激發波長365nm，發射波長435nm;

圖1黃曲霉毒素M1標樣圖譜

圖2 牛乳樣品中黃曲霉毒素M1圖譜

3)能力驗證中注意事項

樣品貯存：拿到能力驗證考試樣后，如果不馬上做應放入冰箱4°C保存;

標準物質：應使用有證標準物質，biopure(ROMER)、色譜科(SUPELCO)等有證標準溶液都可以，貯備液用乙腈配置，工作液標樣直接用流動相配制;

洗脫步驟：免疫親和柱的使用按照各廠家說明書操作。洗脫液一般使用色譜純的試劑。

樣品質控：1)添加回收;2)實物標樣;

取樣：離心后取清液時，注意不要將離心后的脂肪層混入。

濃縮：注意氮吹的流量和溫度，氮氣流量不可太大。

陽性樣本：日常檢測中留意保留陽性樣本，作為質控參考。

二、牛乳中鉛的測定

1.我國牛乳中鉛的限量要求GB 2762-2012《食品安全國家標準 食品中污染物限量》中明確規定鉛含量不得超過0.05mg/kg。

2、鉛的檢測方法目前現有鉛的檢測方法有石墨爐原子吸收光譜法、氫化物原子熒光光譜法、火焰原子吸收光譜法、二硫腙比色法、單掃描*譜法等?，F行有效的標準主要為GB 5009.12-2010《食品安全國家標準食品中鉛的測定》，牛乳中鉛的測定主要推薦使用GB 5009.12-2010中的**法(石墨爐原子吸收光譜法)和第二法(氫化物原子熒光光譜法)，從日常檢測經驗來看，**法更適用于測定牛乳中的鉛。

3、牛乳中鉛的測定操作注意事項1)空白試驗

鉛的測定過程中需做試劑空白實驗，為了有效控制試劑空白處于較低水平，對測定結果不產生不良影響，一般需要注意兩個方面：

器皿的清洗——實驗過程中需要用到的所有器皿都應在(1+5)的硝酸中浸泡過夜，用水反復沖洗，*后用去離子水沖洗干凈后方可投入使用。

試劑純度及水的要求——測定過程中使用的水應為GB/T6682規定的一級水，使用的硝酸、高氯酸應為優級純或以上，并對所使用的酸作為關鍵性試劑進行驗收。