什么是體外細胞毒性試驗？

體外細胞毒性試驗是一種在離體狀態下模擬生物體生長環境，檢測醫療器械及生物材料接觸機體組織后所發生的細胞溶解、抑制細胞生長和其他毒性作用的體外試驗。體外細胞毒性試驗是醫療器械生物學評價體系中*重要的檢測指標之一，幾乎也是醫療器械及生物材料臨床應用前的必選項目

體外細胞毒性試驗依據的相關標準

ISO 10993-5:2009 Biological Evaluation of Medical Devices -Part 5: Tests for in vitro Cytotoxicity

GB/T16886.5-2007醫療器械生物學評價?第5部分：體外細胞毒性試驗，GB/T16886是由ISO 10993轉化過來的標準

GB/T 16175-2008? 醫用有機硅材料生物學評價試驗方法

GB/T 14233.2-2005 醫用輸液、輸血、注射器具檢驗方法 第2部分：生物試驗方法

YY/T0127.9-2009口腔醫療器械生物學評價 第2單元 試驗方法 細胞毒性試驗：瓊脂擴散法及濾膜擴散法?

體外細胞毒性試驗的目的和意義

目的：評級醫療器械和生物材料致細胞毒性反應的潛在性，并預測*終生物體應用時的組織細胞反應。通過體外細胞培養技術，可檢測供試品接觸細胞后細胞發生生長抑制、功能改變、細胞溶解、死亡或其他毒性反應。

意義：可在短時間內較經濟、簡便地篩選出批量供試品的細胞毒性，它為動物試驗的進行與否提供了先決條件，對新型醫療器械及生物材料的研制和應用提供了重要保證。?

體外細胞毒性試驗方法

體外細胞毒性試驗具有通用性，可以適用于各種醫療器械和生物材料的評價，GB/T16886.5標準不是規定一個單一的試驗方法，而是規定一個試驗方案，需要在一系列試驗步驟中判斷，以選出*合適的試驗，試驗主要分三類：浸提液試驗，直接接觸試驗和間接接觸試驗（瓊脂擴散試驗和濾膜擴散試驗）。

由于醫療器械產品和材料的多樣性，植入機體環境中的變異性，與機體相互作用的復雜性等因素，選擇哪種方法進行體外細胞毒性評價，不同的試驗人員會有不同的選擇。當一個評價項目具有多個試驗方法時，應考慮試驗的原理、靈敏性、可選性、可定量性、重現性、試驗材料的適用性及局限性等因素進行選擇。例如浸提液法適合檢測溶出物的毒性；直接接觸法對材料的細胞毒性敏感性*高，可檢測出材料微弱的細胞毒性，間接接觸法中的瓊脂擴散試驗適合于毒性大的大批量材料篩選，濾膜擴散法適合于小分子量毒性材料的評價。以上各種方法因原理不同，各有特點，應根據試驗材料本身理化性質、毒性作用強弱及其用途，正確地選擇試驗方法。

浸提液試驗-MTT法，XTT法和WST-8法比較

MTT（二苯基四氮唑）法，又稱MTT比色法，檢測原理是活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法有靈敏度高、較經濟的優點。

XTT（二甲氧唑黃）是類似MTT的化合物，XTT法檢測原理與MTT法相同。在電子耦合試劑存在的情況下，活細胞線粒體中存在與輔酶Ⅱ相關的脫氫酶，可將黃色的XTT還原成水溶性的橘黃色的甲瓚，生成的甲瓚能夠溶解在組織培養基中，不形成顆粒，可直接用酶標儀測定吸光值。

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WST-8（四唑單鈉鹽）屬于MTT的升級產品，檢測原理是在電子耦合試劑存在的情況下，WST-8可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲瓚產物。產物顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450nm波長處測定OD值，間接反映活細胞數量。該方法簡便、準確、靈敏度高，但是價格比MTT法略高。

醫療器械測試周期：

2周，具體視產品而定，可詢問我司醫療工程師；

體外細胞毒性檢測送樣要求：

ISO 10993標準：?固體或粉末狀： 2個完整樣品，每個樣品需120 cm2 或 4 g及以上； 液體或化學品：10ml及以上

ISO 7405標準： ??固體或粉末狀： 2個完整樣品，每個樣品需120 cm2 或 4 g及以上； 液體或化學品：10ml及以上

GB 16886/?14233標準：??固體或粉末狀： 2個完整樣品，每個樣品需120 cm2 或 4 g及以上； 液體或化學品：10ml及以上

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