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性激素測試

作者:百檢網 時間:2021-12-06 來源:互聯網

1 范圍本規范規定了測定化妝品中雌三醇等7 種性激素的高效液相色譜-二*管陣列檢測器法、高效液相色譜-紫外檢測器/熒光檢測器法和氣相色譜/質譜鑒定法。本規范適用于化妝品中雌三醇等7 種性激素的檢測和鑒定。**法 高效液相色譜-二*管陣列檢測器法2 方法提要以有機溶劑提取化妝品中的性激素,用高效液相色譜儀進行分析,以保留時間和紫外吸收光譜圖或熒光光譜圖定性,以峰面積進行定量。各激素的檢出限及取1g 樣品時的檢出濃度見表1。表1 各激素的檢出限和檢出濃度激素組分 雌三醇 雌酮 己烯雌酚雌二醇睪丸酮甲基睪丸酮 黃體酮檢出限,μg 0.02 0.04 0.01 0.02 0.002 0.002 0.003檢出濃度,μg/g 40 80 20 40 4 4 63 試劑本標準所用試劑除另有說明外,均為優級純試劑。3.1 甲醇。3.2 飽和氯化鈉溶液。3.3 環己烷。3.4 硫酸 [?(H2SO4)=2%]:取硫酸(ρ20=1.84g/mL)2mL,緩慢加入到98mL 水中,混勻。3.5 激素標準溶液3.5.1 雌激素標準溶液[ρ(雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚)=2g/L]:分別稱取雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚各0.200g,用少量甲醇(3.1)溶解,移至100mL 容量瓶中,用甲醇稀釋到刻度。3.5.2 雄激素標準溶液[ρ(睪丸酮、甲基睪丸酮)=600mg/L]:分別稱取睪丸酮、甲基睪丸酮各0.600g,用少量甲醇(3.1)溶解,轉移至100mL 容量瓶中,用甲醇稀釋到刻度。1mL此溶液含以上兩種雄激素6.00mg。移取此標準溶液10.0mL 置于100mL 容量瓶中,用甲醇(3.1)稀釋到刻度。3.5.3 孕激素標準溶液[ρ(黃體酮)=600mg/L]:稱取黃體酮0.600g,用少量甲醇(3.1)溶解,轉移至100mL 容量瓶中,用甲醇稀釋到刻度。1mL 此溶液含孕激素6.00mg。移取此標準溶液10.0mL 置于100mL 容量瓶中,用甲醇(3.1)稀釋到刻度。2213.5.4 混合標準使用溶液:分別移取雌激素標準溶液(3.5.1)50.0mL,雄激素標準溶液(3.5.2)5.00mL 和孕激素標準溶液(3.5.3)5.00mL 置于100mL 容量瓶中,用甲醇(3.1)稀釋到刻度。1mL 此溶液分別含4 種雌激素各1.00mg、2 種雄激素各30.0μg 和1 種孕激素30.0μg。4 儀器4.1 高效液相色譜儀,具等容泵、二*管陣列檢測器或熒光檢測器。4.2 離心機。4.3 具塞比色管,10mL。5 分析步驟5.1 樣品預處理5.1.1 溶液狀樣品:準確稱取樣品1g~2g 于10mL 具塞比色管中,在水浴上餾除乙醇等揮發性有機溶劑,用甲醇(3.1)稀釋到10mL,備用。5.1.2 膏狀、乳狀樣品:準確稱取樣品1g~2g 于100mL 錐形瓶中,加入飽和氯化鈉溶液(3.2)50mL,硫酸(3.4)2mL,振蕩溶解后轉移至100mL 分液漏斗。以環己烷(3.3)30mL 分三次萃取,必要時離心分離。合并環己烷并在水浴上餾除。用甲醇(3.1)溶解殘留物,轉移到10mL 具塞比色管中,用甲醇稀釋到刻度。混勻后,經0.45μm 濾膜過濾,濾液備用。5.2 色譜參考條件色譜柱:C18 柱,250×4.6mm,10μm;檢測波長:二*管陣列檢測器(雌性激素-204nm,雄性激素-245nm)或熒光檢測器(激發波長280nm,發射波長310nm);流動相:甲醇+水=60+40;流速:1.3mL/min;5.3 校準曲線的制備移取激素標準使用溶液(3.5.4)0.00、1.00、2.00、5.00mL 置于10mL 具塞比色管中,用甲醇(3.1)稀釋到刻度。調節儀器到*佳狀態,取樣5μL 注入高效液相色譜儀,以標準品的峰面積繪制校準曲線。5.4 測定取待測溶液5μL 注入高效液相色譜儀,根據峰的保留時間和紫外吸收光譜圖或熒光光譜圖定性,根據峰面積從曲線上查出待測溶液中激素的質量濃度。6 計算ρ×Vω(激素)=m式中:ω(激素)——樣品中激素的質量分數,μg/g;ρ——從曲線上查出測試溶液中激素的質量濃度,mg/L;V——樣品定容體積,mL;m——樣品取樣量,g。2227 色譜圖第二法 高效液相色譜-紫外檢測器法/熒光檢測器法8 方
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