近幾十年來抗生素，尤其是β-內酰胺類抗生素，由于其在人類醫學和獸藥學上有效地預防和治療各種傳染性疾病而備受關注。青霉素屬于β-內酰胺類抗生素，由于其藥效高、價格低廉、使用方便，已成為臨床上治療細菌感染*常用的抗生素，在畜牧獸醫水產養殖領域也得到了廣泛的應用。同時，抗生素殘留也成為國際貿易的壁壘。歐盟指令NO.2377/90/EEC對青霉素類抗生素在動物源性食品中的殘留進行了嚴格限制。所以對動物源性食品中此類抗生素殘留的有效監測已經成為保障食品安全的一個重要環節。為滿足殘留檢測的需要，建立一種動物源性食品中青霉素類抗生素殘留的分析方法非常重要。

中國肉類食品綜合研究中心的馬燕紅，王 妍，李志剛等人旨在建立一種動物源性食品中青霉素G、苯唑西林、乙氧萘青霉素、雙氯青霉素4 種青霉素類藥物的高效液相色譜檢測方法。采用乙腈-水提取目標化合物，HLB固相萃取柱凈化，高效液相色譜法對不同基質中4 種青霉素類藥物進行測定，并驗證了所建方法的選擇性、準確性、穩定性和靈敏性。

1、儀器條件的優化

本實驗在大量文獻和前期工作的基礎上，對比乙腈-水、乙腈-0.02 mol/L乙酸銨溶液、乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液和乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液作為流動相，標準物質出峰的半峰寬、分離度、保留因子等參數情況。結果表明：采用乙腈-水為流動相進行實驗時，溶劑峰嚴重拖尾，且化合物不出峰，原因可能是流動相中不含鹽，與固定相無保留；在流動相中加入鹽后，化合物與固定相作用，可以正常出峰，但乙腈-0.02 mol/L乙酸銨溶液為流動相時，色譜峰的半峰寬大于乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液為流動相時的峰寬；加大鹽的濃度，峰形變窄，變尖。但考慮到鹽濃度增大在色譜柱中易結晶，影響色譜柱壽命，本實驗選取乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液作為流動相。

2、提取條件的選取

提取溶劑的選擇

用乙腈和乙腈-水（10∶1，V/V）作提取溶劑時，回收率均在90%左右，后者回收率略高，其他2 組回收率較低?？赡苁怯捎谝译嫣崛r沉淀蛋白完全，易于離心分離，提前加入水能先溶解目標化合物。故本實驗選取乙腈-水（10∶1，V/V）作為提取溶劑。

SPE柱的選擇

本實驗比較了這2 種SPE柱在相同條件下的回收率。加標量為50 μg/kg，3 mL甲醇、3 mL水活化，上樣，水淋洗后抽干，*后用2 mL甲醇＋2 mL乙腈洗脫，N2吹干后乙腈復溶。HLB柱對目標化合物的回收率均高于C18柱。

SPE洗脫條件的優化

洗脫液為2 mL甲醇＋2 mL乙腈時，4 種化合物的回收率明顯提高。當在活化和淋洗劑中加入堿性磷酸緩沖鹽時，回收率達到了90%左右。可能是堿性磷酸鹽緩沖液防止待測物降解。*終確定SPE萃取小柱的*佳條件為：選取HLB萃取柱，采用方案4的方式凈化。

3、方法的驗證

標準曲線、檢出限和定量限結果

各目標化合物標準曲線的相關系數均大于0.999，顯示了良好的相關性。檢出限和定量限采用空白樣品中添加青霉素類化合物的方法，分別以信噪比不小于3和信噪比不小于10計算。各青霉素的檢出限為3 μg/kg，定量限為10 μg/kg，可以滿足青霉素類化合物的定性及定量測定要求。

精密度測定結果

在空白豬肉樣品中進行精密度實驗，樣品添加不同含量的標準溶液后，渦旋混勻，于室溫放置10 min，使待測成分與樣品機體成分互相作用達到平衡，做6 次重復實驗，測定結果的相對標準偏差在10%以內。

回收率測定結果

在不同的基質中，3 個水平的回收率在69.9%～100.3%范圍內。從精密度和回收率的結果可以得出，該方法有較高的準確性和可靠性。

實際樣品驗證

從市場中選取5 種基質進行方法驗證，分別為豬肉、牛肉、羊肉、雞肉、草魚，目標化合物出峰處均無干擾、未檢測出4 種青霉素類藥物殘留。

結 論

本實驗以水合氨芐青霉素作為內標，建立一種高效液相色譜法檢測動物源性食品中的青霉素G鉀鹽、苯唑西林、乙氧萘青霉素、雙氯青霉素4 種青霉素類藥物殘留量的方法。采用直接進樣，無需衍生化，內標法定量提高了回收率。該方法前處理簡單、快速、準確、靈敏，可以滿足實際檢測分析的需要。