作者:百檢網(wǎng) 時(shí)間:2022-04-15 來源:互聯(lián)網(wǎng)
酶活性指的是有機(jī)體的生命活動(dòng)表現(xiàn)了它內(nèi)部化學(xué)反應(yīng)歷程的有序性,這種有序性是受多方面因素調(diào)節(jié)的,一旦破壞了這種有序性,就會(huì)導(dǎo)致代謝紊亂,產(chǎn)生疾病,甚至死亡。酶活力受到調(diào)節(jié)和控制是區(qū)別于一般催化劑的重要特征。酶活性檢測(cè)去哪里做?百檢網(wǎng)可對(duì)各類樣品的酶活性進(jìn)行檢測(cè),獨(dú)立的第三方檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室,出具第三方酶活性檢測(cè)報(bào)告。
酶活性檢測(cè)范圍
飼料用大豆制品,辣根過氧化物,飼料用纖維素,幾丁質(zhì),谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶,絡(luò)氨酸酶活性,酶制劑,乳清粉等。
檢測(cè)方法
分光光度法,濾紙法。
酶活性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)
1GB/T 5521-2008糧油檢驗(yàn) 谷物及其制品中α-淀粉酶活性的測(cè)定 比色法
2GB/T 8622-2006飼料用大豆制品中尿素酶活性的測(cè)定
3GB/T 156 0190 2607-2009飼用植酸酶活性的測(cè)定 分光光度法
4GB/T 23881-2009飼用纖維素酶活性的測(cè)定 濾紙法
5GB/T 30990-2014溶菌酶活性檢測(cè)方法
6GB/T 32131-2015辣根過氧化物酶活性檢測(cè)方法比色法
7GB/T 33409-2016β-半乳糖苷酶活性檢測(cè)方法 分光光度法
8GB/T 34795-2017谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶活性檢測(cè)方法
9GB/T 34799-2017幾丁質(zhì)酶活性檢測(cè)方法
10GB/T 35808-2018林業(yè)生物質(zhì)原料分析方法 纖維素酶活性測(cè)定
測(cè)定方法
酶活力測(cè)定常用的方法有終點(diǎn)法和動(dòng)力學(xué)方法兩類。
終點(diǎn)法
測(cè)定完成一定量反應(yīng)所需的時(shí)間,如α-淀粉酶的活力測(cè)定。因?yàn)榈鈱?duì)淀粉呈現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng),當(dāng)?shù)矸廴芤褐屑尤氲矸勖负?,碘的藍(lán)色反應(yīng)消失而呈現(xiàn)紅棕色;碘對(duì)淀粉顏色反應(yīng)消失的時(shí)間可表示淀粉酶活力的大小。碘對(duì)淀粉顏色反應(yīng)消失花的時(shí)間越短,表示酶的活力越高。
動(dòng)力學(xué)方法
測(cè)定一定時(shí)間內(nèi)所起的化學(xué)反應(yīng)量。
①比色法 如果酶反應(yīng)的產(chǎn)物可與特定的化學(xué)試劑反應(yīng)而生成穩(wěn)定的有色溶液,且生成顏色的深淺與產(chǎn)物的濃度在一定的范圍內(nèi)有線性關(guān)系可用此法。如蛋白酶的活力測(cè)定:蛋白酶可水解酪蛋白,產(chǎn)生的酪氨酸可與福林試劑反應(yīng)生成穩(wěn)定的藍(lán)色化合物,在一定的濃度范圍內(nèi),所生成藍(lán)色化合物顏色的深淺與酪氨酸的量之間有線性關(guān)系,可用于定量測(cè)定。
②量氣法 主要用于有氣體產(chǎn)生的酶促反應(yīng)。如氨基酸脫羧酶、脲酶的活力測(cè)定。產(chǎn)生的二氧化碳量可用特制的儀器如瓦氏呼吸儀測(cè)定之。根據(jù)氣體變化和時(shí)間的關(guān)系,即可求得酶反應(yīng)的速度。
③滴定法 如果產(chǎn)物之一是自由的酸性物質(zhì)可用此法。如脂肪酶催化脂肪水解,脂肪酸的增加量代表脂肪酶的活力。
④分光光度法 利用底物和產(chǎn)物光吸收性質(zhì)的不同,可直接測(cè)定反應(yīng)混合物中底物的減少量或產(chǎn)物的增加量。幾乎所有的氧化還原酶都使用該法測(cè)定。如還原型輔酶Ⅰ(NADH2)和輔酶Ⅱ(NADPH2)在340nm有吸收,而NAD和NADP在該波長(zhǎng)下無吸收,脫氫酶類可用該法測(cè)定。該法測(cè)定迅速簡(jiǎn)便,自動(dòng)掃描分光光度計(jì)的使用對(duì)酶活力的快速準(zhǔn)確的測(cè)定提供的*大的方便。
⑤放射測(cè)量法 是酶活力測(cè)定中較常用的一種方法。一般用放射性同位素標(biāo)記底物,在反應(yīng)進(jìn)行到一定程度時(shí),分離帶放射性同位素標(biāo)記的產(chǎn)物并進(jìn)行測(cè)定,就可測(cè)知反應(yīng)進(jìn)行的速度。常用的同位素有3H,14C,32P,35S,131I等。如脲酶,將底物尿素用14C標(biāo)記,產(chǎn)生的帶放射性的CO2氣體可用標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)法進(jìn)行測(cè)定。
⑥酶偶聯(lián)分析 某些酶本身沒有合適的測(cè)定方法,但可偶聯(lián)另一個(gè)酶反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定。其基本方法為:應(yīng)用某一高度專一性的工具酶使被測(cè)酶反應(yīng)能繼續(xù)進(jìn)行到某一可直接連續(xù)且簡(jiǎn)便準(zhǔn)確測(cè)定階段的方法。如:被測(cè)E1反應(yīng)的產(chǎn)物B是某一脫氫酶(E2)的底物,向反應(yīng)體系中加入足量的脫氫酶和NAD+或NADPH+,使反應(yīng)由A經(jīng)B繼續(xù)進(jìn)行到C,然后測(cè)定NADH或NADPH的特征吸收光譜的變化,即可間接地測(cè)定E1的活力大小。如己糖激酶的活力測(cè)定即應(yīng)用這一方法。注意:使用該法要求指示酶必須很純,且具有高度的專一性,以免干擾反應(yīng)而給測(cè)定帶來麻煩。
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