專家解讀

近年來，獸藥在畜牧生產中的應用增加，由此導致的動物性食品中獸藥殘留問題日益突出。獸藥殘留分析是復雜混合物中痕量組分的分析技術，既需要精細的微量操作手段，又需要高靈敏的痕量檢測技術，難度大、儀器化程度和分析成本高，分析質量控制和分析策略有特殊要求。

現對獸藥殘留分析中的檢測方法作簡要介紹：

檢測技術

有許多高靈敏、通用性或專一性強的檢測器供選用，如氫焰離子化檢測器(FID)、氮磷檢測器(NPD)等。但是大多數獸藥*性或沸點偏高，需繁瑣的衍生化步驟，限制了氣相色譜法(GC)的應用。所以，20世紀80年代后HPLC的發展速度超過GC，相當數量的獸藥采用或改用HPLC進行分析，如氯霉索、磺胺類藥物等。

1、標記免疫分析技術

常見標記免疫分析技術及其應用有哪些：

(1)放射免疫分析

放射免疫分析(Radioimmunoassay，RIA)是*早建立的標記免疫檢測方法。1968年，Centeno等首次將RIA用于DDT和馬拉硫磷的檢測，其后該技術在對硫磷、克百威、百草枯、氯霉素、青霉素等農獸藥殘留檢測中得到了廣泛應用。

(2)酶免疫分析

酶免疫分析(Enzyme immunoassay，EIA)是在抗原或抗體分子上標記特定的酶，依據抗原抗體反應的特異性和酶催化顯色反應的高效性對超微量殘留物進行檢測。酶聯免疫吸附分析法(Enzyme.1inkedImmunosorbent Assay，ELISA)是目前*常用的酶免疫分析方法。ELISA法是一種非均相免疫測定方法，即抗原、抗體反應在固液相間進行，反應平衡后需要進行兩相分離，在實際應用中檢測農獸藥等小分子物質常采用間接競爭ELISA法和包被抗體(或抗原)直接競爭ELISA法。迄今為止，已建立了有機磷、擬除蟲菊酯、三嗪類、磺胺類及氟喹諾酮類等農獸藥的單殘留和多殘留ELISA檢測方法。

(3)熒光免疫分析

熒光免疫分析(Fluorescent immunoassay，FIA)的種類很多

例如，時間分辨熒光免疫分析(Time resolved fluoroimmunoassay，TRFIA);

熒光偏振免疫分析(Fluorescence polarizafion Immunoassay，FPIA);

熒光猝滅免疫分析(Fluorescence quenching immunoassay，FQIA);

熒光增強免疫分析(Fluorescence enhancedimmunoassay，FEIA)等，它們以熒光物質為標記物，基于免疫反應對待測物進行檢測。在藥物殘留分析方面，TrFIA的研究目前僅局限于敵草隆、甲草胺、沙丁胺醇等少數農獸藥。

(4)化學發光免疫分析

發光物質主要有物理、化學和生物發光三類。在小分子藥物殘留檢測中，化學發光免疫分析(Chemiluminescence immunoassay，CLIA)的應用*廣泛。CLIA以發光物質或酶標記抗原或抗體，標記抗原和抗體與待測物反應后經分離、洗滌等步驟，加入氧化劑或酶底物而發光，通過測量*后的化學發光強度，利用標準曲線測定待測物的含量。目前國內外已建立了甲基對硫磷、涕滅威、克百威、氯氰菊酯、氯霉素、鏈霉素、鹽酸克倫特羅等農獸藥方法。

(5)膠體金標記免疫分析

膠體金標記免疫分析技術(Colloidal gold immunoassay，CGIA)采用納米金顆粒來標記抗體，當金標抗體聚集到一定密度時，出現肉眼可以觀察紫紅色，實現對抗原和抗體反應結果進行測定。實際應用中一般通過制備抗農藥或獸藥的單克隆抗體，將其做成膠體金免疫層析測試條，直接檢測樣品中的農藥或獸藥殘留。

2、其他免疫分析技術

(1)以量子點為探針的免疫分析

導體量子點納米晶(semiconductor quantum dots nanocrystai)，簡稱量子點(quantum dots,QDs)，特別是IIB-VIA族熒光量了點(如CdSe,CdTc)，在納米尺度時表現出許多獨特的光、電特性。在農獸藥等小分子化合物殘留檢測方面的研究則剛起步。

(2)基于核酸適體的免疫分析

核酸適體(Aptamer)是一種功能類似抗體的新型仿生生物識別分子，它是利用指數富集配體系統進化(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX)技術，從人工體外合成的隨機DNA/RNA文庫中篩出的一段單鏈寡核苷酸片段畔]，一般由25～80個堿基組成，它的出現對以抗體為關鍵試劑的免疫分析技術的發展具有重要意義。

3、單鏈抗體技術

單鏈抗體技術(scFv)是抗體分子中保留抗原結合部位的*小功能片段的一種新型重組蛋白，由重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)通過一段約15～25個氨基酸殘基構成的彈性短肽(Linker)以非共價鍵相連而成，分子質量約為完整抗體分子的1/6，具有單一抗原結合位點、分子質量小、組織穿透力強、體內清除快、免疫原性低、易于在大腸桿菌中表達和進行基因進化等特點。

4、蛋白芯片的應用

蛋白芯片獸藥殘留檢測試劑盒集成了樣品前處理及樣品檢測過程，該項技術是二十一世紀發展起來的一種新的食品中獸藥殘留量檢測技術。目前，該試劑盒可以實現對豬肉、豬肝、雞肉、雞肝4種組織以及豬尿中恩諾沙星、磺胺二甲嘧啶、鏈霉素、克侖特羅的半定量檢測，除具有靈敏度高、特異性強、樣品前處理簡單，檢測方便快速等優點外，還可實現對上述多種獸藥同時并行檢測的優點，*大地節省了檢測費用，縮短了檢測時間，進而提高了檢測效率。

5、穩定性同位素分析

同位素稀釋質譜法(IDMS)是通過同位素豐度的精確質譜測量和所加入稀釋劑的準確稱量，求得待測樣品中某元素的**量，從而有效地把元素的化學分析轉變為同位素測量。即在待測同位素樣品中，加入一定量含該元素另一同位素的稀釋劑使其均勻混合，達到同位素交換平衡后，測定相應同位素豐度比值，即可定量測定待測同位素含量，因此，該方法具有同位素質譜測量的高精度和化學計量的高準確度。

6、液相色譜一質譜聯用技術

液相色譜一質譜聯用技術非常適合在食品檢測領域中開展對違禁藥物的檢測、有毒有害物質的分析和多組分藥物殘留的分析等大量工作。尤其是對違禁藥物和生物毒素的檢測具有準確、靈敏、檢出限低等優點。

7、分子印跡技術

分子印跡聚合物(MolecularlyImprinted Polymers，MIPs)由于具有高度選擇性、專一識別性、高度穩定性和使用壽命長等優點，在許多領域，如固相萃取、傳感器、色譜固定相、模擬抗體、模擬酶催化、膜分離等方面具有廣闊應用前景。MIP理化性質穩定，具有耐酸堿、有機溶劑及環境因素的影響，又具有良好的分子識別能力，所以非常適合作為傳感器的識別元件。因此分子印跡技術使人們可以根據分析對象進行分子設計，制備出相應的分子識別元件，提高傳感器對被分析物的選擇性。

8、SPR-生物傳感器

生物傳感器是用生物活性材料(酶、蛋白質、DNA、抗體、抗原、生物膜等)與物理化學換能器有機結合的分析儀器，是一種較先進的檢測與監控方法，也是物質分子水平的快速和微量分析方法。在獸藥殘留分析中，SPR-生物傳感器大部分應用在牛奶中抗微生物藥物殘留分析的研究上，例如檢測磺胺二甲嘧啶、恩氟沙星、鏈霉素和異阿凡曼菌素。