冰淇淋中磷酸酶怎么檢測(cè)?目前對(duì)于冰淇淋中磷酸酶有對(duì)應(yīng)的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)。今天百檢網(wǎng)就給大家介紹一下冰淇淋中磷酸酶的測(cè)定方法相關(guān)信息。

檢測(cè)步驟：

步驟1——分取1.0ml樣品放入2個(gè)或3個(gè)試管中(1個(gè)試管作為對(duì)照或空白，*好有兩個(gè)以上試管進(jìn)行平行測(cè)定)(山羊奶用3ml樣品)。

步驟2——在沸水的帶蓋的燒杯中加熱空白約1min(整個(gè)試管溫度必須在85—95℃)，冷卻到室溫。逐個(gè)同樣處理空白和試樣。

步驟3——加10.0mlBa緩沖基質(zhì) (b)(1)或 (2)，塞緊試管，混合 (pH10.0±0.15)。(這個(gè)基質(zhì)對(duì)鮮奶，甜脫脂酸奶或干酪乳漿是很滿意的。對(duì)于長(zhǎng)時(shí)間或輕微發(fā)酸的牛奶，使用由未稀釋的緩沖溶液(a)(1)制備的基質(zhì);對(duì)于巧克力飲料，用由1/4體積水稀釋的緩沖液制備的基質(zhì);對(duì)于很酸(pH<4.5)的脫脂酸奶，由26—11緩沖液18-128A(a)(2)制備基質(zhì);而對(duì)于山羊奶，由27—11緩沖液A(a)(2)制備基質(zhì)。

對(duì)未知樣品的定量結(jié)果，調(diào)節(jié)pH到l0.0—10.05。

步驟4——加入基質(zhì)后，立即在37—38℃水浴上培養(yǎng)1h，不時(shí)地混合或搖動(dòng)。

步驟5——在沸水燒杯中加熱約1min(試管中物質(zhì)的溫度應(yīng)達(dá)到85—90℃，在另一個(gè)同樣大小和形狀含有同樣體積液體的試管中用溫度計(jì)測(cè)定)。在冷水容器中冷卻到室溫。

步驟6——對(duì)于鮮奶，甜脫脂酸奶或干酪乳漿，移取1.0mlZn—Cu蛋白質(zhì)沉淀劑(C)。(對(duì)于長(zhǎng)時(shí)間的或輕微發(fā)酸的牛奶或酸化脫脂酸奶，以1.0m16.0%的ZnSO4·7H2O溶液代替;對(duì)巧克力飲料，用1.0ml含4.5gZnSO4·7H2O和0.1gCuSO4·5H2O/100ml溶液;而對(duì)山羊奶，用1.0m1含7.5gZnSO4·7H2O和0.1gCuSO4·5H2O/100ml的溶液)充分混合 (混合物的pH應(yīng)為9.0—9.1)。

步驟7——過(guò)濾(5cm漏斗，9cmWhatman42號(hào)或2號(hào)濾紙，或相當(dāng)?shù)?并把5.0ml濾液收集在試管中，*好用刻度在5.0和10.0ml的試管。

步驟8——加5.0ml發(fā)色緩沖液 (a)(2)(混合物的pH應(yīng)為9.3—9.4)。

步驟9——加4滴BQC溶液(d)混合，在室溫發(fā)色30min(對(duì)只檢驗(yàn)不足的巴氏滅菌，僅加2滴BQC溶液)。

步驟10——用下列方法之一測(cè)定藍(lán)色的強(qiáng)度:

(a)用光度計(jì)——讀空白和試液的顏色強(qiáng)度(使用具有*大T的大約610nm的濾光片)，從試樣讀數(shù)中減去空白的讀數(shù)，參考標(biāo)準(zhǔn)曲線 (g)(2)，把結(jié)果轉(zhuǎn)化為酚當(dāng)量。[使用光度計(jì)時(shí)，一般不必用BuOH萃取;如果按(b)中進(jìn)行BuOH萃取，離心5min破壞乳膠體并除去懸浮在乙醇層中的水。(Babcock離心瓶對(duì)這個(gè)目的是適用的用如下制作專(zhuān)用的試管架:從適當(dāng)直徑的橡膠塞上切下6mm厚，裝進(jìn)離心杯的底部，把2個(gè)適當(dāng)直徑的軟木塞粘在一起，通過(guò)中心打一個(gè)適當(dāng)大小的洞，以便固定試管，把一對(duì)軟木塞插入杯中。)離心后，用頂部帶橡皮球的移液管，除去幾乎全部BuOH。滲入光度計(jì)池中，用具有*大T約650nm濾光片讀數(shù)]。

(b)用目視標(biāo)準(zhǔn)——對(duì)于產(chǎn)生大于5個(gè)顏色單位的樣品，將試管中的顏色與酚標(biāo)準(zhǔn)水溶液 (g)(2)的顏色比較。對(duì)于邊界情況的定量結(jié)果 (即試樣產(chǎn)生0.5—5顏色單位)，用BuOH(f)萃取。加5.0mlBuOH并慢慢顛倒試管幾次;如果必須提高乙醇層的清晰度，可按 (a)中離心，與經(jīng)同樣處理的酚標(biāo)準(zhǔn)液 (g)(2)的顏色比較。

步驟11——發(fā)色中，觀察到強(qiáng)烈的陽(yáng)性試驗(yàn)中(即≥20單位)，用4滴BQC可能不足以與所有酚結(jié)合，移取適量部分到另一管中用稀發(fā)色緩沖液(a)(3)稀釋到10.0ml，再加2滴的BQC溶液。對(duì)于每個(gè)試驗(yàn)都稀釋而且同樣處理空白。如果稀樣品試驗(yàn)仍是很強(qiáng)的陽(yáng)性，再用同樣方法稀釋直到*終顏色在目視標(biāo)樣或光度標(biāo)樣曲線范圍之內(nèi)。在*后一次加入BQC后，進(jìn)行*后讀數(shù)前，使其發(fā)色30min。為校正稀溶液的讀數(shù)，對(duì)于5+5稀溶液乘以2，對(duì)于1+9稀溶液乘以10，對(duì)于2+8稀釋后又1+9稀釋溶液乘以50，等等。

步驟12——用1.0ml樣品加11.0ml試劑(總液體12.0ml，用5.0ml濾液)時(shí):用讀數(shù)值乘以1.2轉(zhuǎn)變?yōu)榉赢?dāng)量/0.5ml樣品。(如果愿意也可以乘2.4將結(jié)果變?yōu)榉赢?dāng)量/1ml樣品)在鮮奶、巧克力飲料、脫脂酸奶和奶酪乳漿中，酚當(dāng)量大于2/0.5ml表明消毒不夠，山羊奶中酚量大于1/1.5ml表明消毒不足。

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