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液相色譜法測定牛奶中的香蘭素與乙基香蘭素

作者:宋檢 時間:2022-10-17 來源:互聯網

香蘭素與乙基香蘭素是人工合成的香精,可增強食品口感,使其清香宜人[1],是食品添加劑行業中不可缺少的重要原料,可直接應用于化妝品、香皂、香煙、糕點、糖果、餅干、奶粉以及烘烤食品中[2]。但大劑量使用香蘭素可以導致頭痛、惡心、嘔吐、呼吸困難,甚至損傷肝、腎,對人體有較大危害。常見香蘭素與乙基香蘭素的分析方法有氣相色譜法[3–4]、分光光度法[5–6]、高效液相色譜(HPLC)法[7]、液相色譜–質譜聯用[8]及其它方法[9–11]。筆者采用HPLC法同時測定香蘭素與乙基香蘭素,通過對牛奶樣品的簡單處理和流動相的優化,使得方法操作簡單,精密度高,重復性好,可用于牛奶中香蘭素與乙基香蘭素的日常檢測。

  1.2標準溶液的制備

  分別取香蘭素與乙基香蘭素標準樣品各1mL,以甲醇溶解并定容于10mL容量瓶中,配制成100mg/L的混合標準儲備液。精密移取0.5mL混合標準儲備液,以流動相溶解并定容于100mL容量瓶中,配制成0.5mg/L的混合標準溶液,過濾,備用。

  1.3樣品溶液的配制

  稱取牛奶樣品5g,以25mL50℃熱水溶解,超聲10min,用5mol/L鹽酸溶液調節至pH1.7,置5min,再用2mol/LNaOH溶液調節至pH4.5,此時溶液變為懸濁液,將此懸濁液轉移至50mL容量瓶中,用純水定容至標線后倒入漏斗,用快速定性濾紙過濾,棄去初濾液,收集中間濾液,充分搖勻,過濾,備用。

  1.4色譜條件

  流動相:甲醇–0.01mol/L磷酸溶液(體積比為30∶70);流速:1.0mL/min;檢測波長:276nm;柱溫:30℃;進樣量:20μL。

  2結果與討論

  2.1流動相組成

  考察了乙腈–乙酸、乙腈–磷酸二氫鉀、甲醇–磷酸等流動相,雖然乙腈的洗脫能力強于甲醇,但其毒性較大,而且香蘭素與乙腈香蘭素的色譜峰形、分離度均不符合分析要求;而用甲醇–磷酸體系可以得到標準對稱的色譜峰形,因此選擇甲醇–磷酸體系作為流動相。

  2.2前處理方法

  牛奶中的蛋白質含量較高,因此樣品要先用50℃熱水超聲提取,再經酸沉淀蛋白后進行測定。實驗結果表明:本方法加標回收率大于98%,且操作簡單,可以滿足牛奶中香蘭素與乙基香蘭素的檢測要求。

  2.3色譜圖

  在1.4色譜條件下香蘭素與乙基香蘭素標準溶液及牛奶樣品的高效液相色譜圖見圖1,由圖1可知,香蘭素與乙基香蘭素分離良好、峰形對稱,符合分析要求。

  2.4精密度試驗

  精密吸取香蘭素、乙基香蘭素混合標準溶液20μL,按照1.4色譜條件連續進樣6次,分別測定香蘭素和乙基香蘭素的色譜峰面積,測定結果列于表1。由表1可知,香蘭素與乙基香蘭素色譜峰面積測定結果的相對標準偏差分別為1.09%,0.89%,表明儀器的精密度良好。

  2.5線性關系、檢出限

  分別精密吸取混合標準溶液0.05,0.1,0.2,0.5,1.0mL于10mL容量瓶中,以流動相稀釋至標線,搖勻,制得不同濃度的混合標準溶液,分別精密吸取20μL,按1.4色譜條件進樣測定色譜峰面積,以標準品濃度X(μg/mL)為橫坐標,峰面積值Y為縱坐標,進行線性回歸,在0.5~10μg/mL的進樣范圍內,香蘭素的線性方程為Y=6.656×10–6X+0.193,r2=0.9997;乙基香蘭素的線性方程為Y=8.022×10–6X+0.194,r2=0.9997,表明二者濃度與色譜峰面積線性關系良好。將混合標準溶液以不同倍數稀釋后進行測定,以峰高為基線噪音3倍時的質量濃度為檢出限,測得香蘭素和乙基香蘭素的檢出限分別為5.68μg/L和12.8μg/L。

  2.6重復性試驗

  精密稱取同一牛奶樣品6份,照上述樣品制備方法制備,按1.4色譜條件進樣測定香蘭素與乙基香蘭素的含量,測定結果見表2。由表2可知,牛奶樣品中香蘭素與乙基香蘭素平均含量為2.014mg/kg和1.990mg/kg,測定結果的相對標準偏差分別為1.35%,1.57%。表明方法測量重復性良好。

  2.7加標回收試驗

  取牛奶樣品9份,每份為5g,每3份為一組,每組分別加入混合標準溶液4,5,6mL,按照1.3樣品溶液的配制方法進行提取和定容后,按1.4色譜條件測定,測定結果見表3。由表3可知,實驗所得香蘭素、乙基香蘭素平均加標回收率為99.8%,98.4%;測定結果的相對標準偏差分別為1.06%,2.31%。

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