脫氫乙酸是國家批準(zhǔn)使用的人工合成防腐劑，近年來被廣泛使用。脫氫乙酸是一種廣譜、抑菌力*強(qiáng)的防霉防腐劑，對霉菌、酵母菌、細(xì)菌有較強(qiáng)的抑制能力[1]，但對人和動物存在一定的毒害性，其添加必須在規(guī)定范圍內(nèi)按規(guī)定限量使用。GB2760–2011《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定脫氫乙酸用于月餅中的*大使用量為0.5g/kg[2]，然而目前存在企業(yè)違規(guī)超標(biāo)使用的現(xiàn)象，因此對月餅中的脫氫乙酸進(jìn)行準(zhǔn)確、快速的定量檢測非常重要。食品中脫氫乙酸的檢測方法一般依據(jù)國家標(biāo)GB5009.121–2003，樣品經(jīng)過有機(jī)相、無機(jī)相反復(fù)萃取凈化后用氣相色譜測定[3]。由于該標(biāo)準(zhǔn)僅適用于果汁、腐乳、醬菜，在處理月餅等高糖、高脂、高蛋白含量的復(fù)雜基質(zhì)的樣品時(shí)，乙醚提取過程的乳化現(xiàn)象特別嚴(yán)重，影響了提取率，回收率較低;而且采用填充柱作為分離柱，其柱效低，靈敏度不高，檢出限、分離效果和重現(xiàn)性都不理想。因此，建立一套適合月餅等復(fù)雜基質(zhì)食品中脫氫乙酸的氣相色譜檢測方法，對于提升食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)?zāi)芰Γ?guī)范食品生產(chǎn)秩序具有重要的意義。

　　筆者以月餅為試材，針對乙醚提取過程中乳化嚴(yán)重的問題，改進(jìn)了樣品前處理方法，選用Rtx-5弱*性毛細(xì)管柱作為分離柱[4]，優(yōu)化GC色譜條件，建

　　立了毛細(xì)管柱氣相色譜法測定月餅等復(fù)雜基質(zhì)食品中脫氫乙酸的方法，并對所建立的檢測方法進(jìn)行了系統(tǒng)的方法驗(yàn)證。

　　1實(shí)驗(yàn)部分

　　1.1主要儀器與試劑

　　氣相色譜儀：GC–2010Plus型，日本島津制作所;自動進(jìn)樣器：AOC–20i+S型，日本島津制作所;乙醚、丙酮：重蒸;無水硫酸鈉、氯化鈉：分析純;硫酸：10%(體積分?jǐn)?shù));硫酸鋅溶液：120g/L;氫氧化鈉溶液：20g/L;脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品：純度大于99.5%，國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心;實(shí)驗(yàn)用水為三級水。

　　1.2試樣制備與提取

　　稱取5.0g充分磨碎的均勻試樣于100mL容量瓶中，加入20mL蒸餾水，5mL硫酸鋅溶液，搖勻，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7～8，加水定容至刻度，過濾。準(zhǔn)確吸取20.0mL濾液于100mL比色管中，加氯化鈉至飽和，用硫酸調(diào)節(jié)pH值至酸性，分別用50，50，30mL乙醚提取3次，靜置分層，用吸管轉(zhuǎn)移乙醚層，經(jīng)無水硫酸鈉脫水后，收集乙醚于250mL錐形瓶中，50℃水浴中濃縮至近干，氮吹除去殘留溶劑，用丙酮定容后供色譜測定。

　　1.3色譜條件

　　色譜柱：Rtx-5毛細(xì)管柱(30m×0.32mm，0.25μm，美國Restek公司);進(jìn)樣量：0.5μL;分流比：1∶40;進(jìn)樣口溫度：240℃;線速度：25.0mL/min;柱流量：0.95mL/min;柱溫：50℃保持1min，以15℃/min的速率升溫至230℃，保持2min;檢測器：FID;檢測器溫度：240℃;尾吹：30.0mL/min;H2流速：40mL/min;空氣流速：400mL/min。

　　2結(jié)果與討論

　　2.1色譜條件的選擇

　　本實(shí)驗(yàn)選擇弱*性Rtx-5毛細(xì)管柱，采用程序升溫，目標(biāo)峰分離度良好，峰型較佳，保留時(shí)間在8.4min左右。色譜條件見1.3，標(biāo)樣氣相色譜圖見圖1。

　　2.2改進(jìn)樣品前處理對測定結(jié)果的影響

　　實(shí)驗(yàn)分別采用本實(shí)驗(yàn)方法和國標(biāo)GB/T5009.121–2003中的處理方法對月餅中脫氫乙酸的含量進(jìn)行測定，結(jié)果見表1。由表1可以看出，采用本法測得的試樣含量高于國標(biāo)法處理的試樣，且回收率明顯高于未進(jìn)行沉淀蛋白處理的試樣，這說明經(jīng)硫酸鋅試劑沉淀和過濾處理，可以有效減輕有機(jī)相萃取時(shí)出現(xiàn)的乳化現(xiàn)象，有利于萃取完全;本法中樣品提取過程處理簡單，回收率高，且節(jié)約了有機(jī)溶劑。

　　2.3線性方程與線性范圍

　　將濃度分別為0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mg/mL的脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述色譜條件，進(jìn)樣0.5μL，進(jìn)行GC分析，測定不同濃度脫氫乙酸的峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表2。

　　2.4檢出限與定量限

　　方法的檢出限[5]是指在通過某一分析方法全部測定過程后，被分析物產(chǎn)生的信號，能以95%置信度區(qū)別于空白樣品而被測定出來的*低濃度。以“*低濃度檢測結(jié)果+3倍標(biāo)準(zhǔn)差”作為檢出限。IUPAC定義定量限(LQD)為“當(dāng)被測組分濃度能

　　產(chǎn)生比空白足夠大的信號，這個(gè)信號能被良好操作實(shí)驗(yàn)室在常規(guī)操作條件下以指定的置信水平定量檢出，這個(gè)濃度就是定量測定下限”，即可以“*低濃度檢測結(jié)果+10倍標(biāo)準(zhǔn)差”所對應(yīng)的濃度作為定量限[7]。

　　本試驗(yàn)將樣本溶液不斷稀釋，按照1.3色譜條件，進(jìn)樣0.5μL，進(jìn)行GC分析，確定檢出限，直到目標(biāo)物的峰高與基線噪音之比為2～3時(shí)[6]，連續(xù)重復(fù)測定9次，根據(jù)每次的積分峰面積，外標(biāo)法計(jì)算其對應(yīng)的濃度，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差s，結(jié)果見表3。

　　本試驗(yàn)以信噪比S/N=3計(jì)，經(jīng)計(jì)算，檢出限為0.24μg/mL，定量下限為0.32μg/mL。以稱樣量5.0g計(jì)，本方法檢測月餅中脫氫乙酸的檢出限約為4.8mg/kg，可以滿足檢測需要[3]。

　　2.5加標(biāo)回收試驗(yàn)

　　選取月餅樣品5份，以雙平行測定結(jié)果的平均值作為樣品中脫氫乙酸的實(shí)際含量，加入一定量標(biāo)準(zhǔn)品后，使其每份含標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.2g/kg，再以雙平行測定結(jié)果的平均值作為加標(biāo)結(jié)果，計(jì)算加標(biāo)回收率，檢測結(jié)果見表4。由表4可知，脫氫乙酸的回收率在87.9%～94.4%之間。

　　2.6精密度試驗(yàn)

　　取樣品12份，加標(biāo)樣使每份樣品含標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.3g/kg，分別按1.2的方法進(jìn)行處理，各進(jìn)樣0.5μL進(jìn)行GC分析，以外標(biāo)法定量，結(jié)果見表5。由表5可知，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.5%，說明該方法具有較高的精密度。

　　3結(jié)論

　　選用Rtx-5弱*性毛細(xì)管柱測定月餅中的脫氫乙酸，通過優(yōu)化色譜條件，獲得了良好的峰型和分離度，建立了*佳GC測定條件;針對月餅基質(zhì)復(fù)雜，蛋白、脂類、糖類含量高，改進(jìn)了樣品提取及凈化方法，消除了乙醚提取過程中的乳化現(xiàn)象，提高了萃取效率。通過驗(yàn)證，證實(shí)該方法可以準(zhǔn)確地進(jìn)行月餅等復(fù)雜基質(zhì)中脫氫乙酸的定性、定量分析檢測，具有一定的應(yīng)用推廣價(jià)值。