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小分子抗原檢測科普

作者:banjian77 時(shí)間:2022-10-18 來源:互聯(lián)網(wǎng)

  半抗原(hapten),又稱不完全抗原(incomplete antigen),是指某些單獨(dú)存在時(shí)不能誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,即不具備免疫原性,但當(dāng)與大分子蛋白質(zhì)或非抗原性的多聚賴氨酸等載體交聯(lián)或結(jié)合(通常是以共價(jià)鍵的形式進(jìn)行結(jié)合)后可獲得免疫原性,從而誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的小分子物質(zhì)。半抗原與蛋白質(zhì)載體或高分子聚合物結(jié)合后才有免疫原性,因此它是只有免疫反應(yīng)性(抗原性)。小分子化合物抗原是*典型的半抗原,常見的半抗原有多糖、類脂、核酸和某些小分子化合物和藥物等。

  小分子抗原制備:

  要制備小分子半抗原的抗體,對小分子的結(jié)構(gòu)有一定的要求,需要一定的復(fù)雜性或剛性,如含有苯環(huán)、雜環(huán)基團(tuán)或者有分支結(jié)構(gòu),否則難以產(chǎn)生抗體或產(chǎn)生的抗體效價(jià)也較低。

  一些小分子半抗原若具有活性基團(tuán),如-COOH、-NH2、-OH等,可以跟載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián),制備完全的人工抗原。如果半抗原沒有可直接與載體共價(jià)連接的基團(tuán),或雖有活性基團(tuán)但這些基團(tuán)對維系半抗原的免疫特性和特征結(jié)構(gòu)十分重要,或直接與載體蛋白連接后半抗原的特征結(jié)構(gòu)易受載體的局部微化學(xué)環(huán)境或空間位阻的干擾影響機(jī)體的免疫反應(yīng),則必須要對半抗原小分子重新設(shè)計(jì),合成修飾化的半抗原。

  小分子抗原結(jié)構(gòu)修飾的常見方法:

  1.琥珀酸酐法將分子結(jié)構(gòu)中帶有羥基的化合物反應(yīng)修飾成帶羧基;

  2.羧甲基羥胺法或?qū)Π被郊姿岱▽Ⅳ驶惖幕衔镄揎棡榱u基;

  3.一氯醋酸鈉法或者重氮化法(酸性條件與亞硝酸鈉反應(yīng)),酚羥基類化合物被修飾為羧基;

  4.Mannish法將胺類的化合物修飾成氨基類化合物。

  常見的載體:

  1.鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH)

  鑰孔血藍(lán)蛋白是一種存在于節(jié)肢動(dòng)物和軟體動(dòng)物中的含銅蛋白質(zhì),分子量在4.5×105~1.3×107Da范圍內(nèi)。KLH具有較高的免疫原性,是*常用的載體,也是用于哺乳動(dòng)物宿主(如兔和小鼠)的理想載體。然而,KLH在水中的溶解度較差,呈絮狀,但這不影響KLH的免疫原性。

  2.牛血清白蛋白(BSA)

  牛血清白蛋白是從牛的血漿中提取的一種蛋白,為可得的*穩(wěn)定、溶解度*高的白蛋白之一。它的分子量為6.7×104Da,其結(jié)構(gòu)中包含有59個(gè)賴氨酸。BSA是弱抗原性化合物的常用載體。由于分子量較小而較易溶于水,BSA常用于免疫測定。然而,因?yàn)锽SA在基于抗體的測定(如ELISA)中常用于封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn),所以若使用針對半抗原-BSA復(fù)合物的抗體進(jìn)行測定會(huì)產(chǎn)生假陽性。

  3.卵清蛋白(OVA)

  卵清蛋白是從雞蛋蛋白中分離出的一種蛋白質(zhì),分子量為45×103Da。OVA通常是用作備用的載體,用來確認(rèn)抗體對半抗原具有特異性而不是對載體。

  小分子抗原抗體的應(yīng)用:

  *小分子化合物的快速檢測;

  *疾病相關(guān)的代謝中間體檢測,監(jiān)測血藥濃度;

  *食品殘留檢測;

  *毒品檢測,興奮劑檢測等

  合成具有良好免疫原性的小分子抗原是進(jìn)行藥物殘留、環(huán)境污染物等相關(guān)檢測的前提和關(guān)鍵。卡梅德生物的小分子平臺(tái)提供應(yīng)用于食品安全殘留,生物制品痕量殘留級(jí)別靈敏度的抗體及相關(guān)服務(wù)。對于小分子抗原抗體的偶聯(lián)和制備,我們積累了許多成功的經(jīng)驗(yàn),可以針對客戶的具體需求,改造或者合成小分子化合物的衍生物,提供不同連接臂的半抗原,或不同載體蛋白的完全抗原。

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