食品β型溶血性鏈球菌測(cè)定方法介紹
作者：小強(qiáng) 時(shí)間：2022-10-20 來源：互聯(lián)網(wǎng)
食品β型溶血性鏈球菌怎么檢測(cè)?目前對(duì)于食品β型溶血性鏈球菌有對(duì)應(yīng)的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)。今天百檢網(wǎng)就給大家介紹一下食品β型溶血性鏈球菌的測(cè)定方法相關(guān)信息。
檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)：GB 4789.11-2014 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) β型溶血性鏈球菌檢驗(yàn)
1.范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中β型溶血性鏈球菌( Streptococcus)的檢驗(yàn)方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中β型溶血性鏈球菌的檢驗(yàn)。
2.術(shù)語(yǔ)和定義
2.1 B型溶血
在菌落周圍形成完全透明的溶血環(huán),紅細(xì)胞完全溶解。
2.2 β型溶血性鏈球菌
能夠產(chǎn)生β型溶血的化膿(或A群)鏈球菌( Streptococcus pν genes)和無(wú)乳(或B群)鏈球(Streptococcus agalactiae)。
3.設(shè)備和材料
除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下:
a) 恒溫培養(yǎng)箱:36℃C±1℃;
b) 冰箱:2℃～5℃;
c) 厭氧培養(yǎng)裝置;
d) 天平:感量0.1g;
e) 均質(zhì)器與配套均質(zhì)袋;
f) 顯微鏡:10倍～100倍;
g) 無(wú)菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.lmL刻度)或微量移液器及吸頭;
h) 無(wú)菌錐形瓶:容量100mL、200mL、2000mL;
i) 無(wú)菌培養(yǎng)皿:直徑90mm;
j) pH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙;
k) 水浴裝置:36℃±1℃;
l) 微生物生化鑒定系統(tǒng)。
4.培養(yǎng)基和試劑
4.1 改良胰蛋白胨大豆肉湯( Modified tryptone soybean broth,mTSB):見附錄A中A.1。
4.2 哥倫比亞CNA血瓊脂( Columbia cna blood agar):見附錄A中A.2。
4.3 哥倫比亞血瓊脂( Columbia blood agar):見附錄A中A3。
4.4 革蘭氏染色液:見附錄A中A4。
4.5 胰蛋白胨大豆肉湯( Tryptone soybean broth,TSB):見附錄A中A.5。
4.6 草酸鉀血漿:見附錄A中A.6。
4.7 0.25%氯化鈣(CaCl2)溶液:見附錄A中A.7。
4.8 3%過氧化氫H2O2)溶液:見附錄A中A8。
4.9 生化鑒定試劑盒或生化鑒定卡。
5.檢驗(yàn)程序
溶血性鏈球菌檢驗(yàn)程序見圖1。
6.操作步驟
6.1 樣品處理及增菌
按無(wú)菌操作稱取檢樣25g(mL),加入盛有225mL mTSB的均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì)1min～2min;或加入盛有225mL mTSB的均質(zhì)杯中,以8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min。若樣品為液態(tài),振蕩均勻即可。36℃±1℃培養(yǎng)l8h～24h。
6.2 分離
將增菌液劃線接種于哥倫比亞CNA血瓊脂平板,36℃±1℃厭氧培養(yǎng)18h～24h,觀察菌落形態(tài)。溶血性鏈球菌在哥倫比亞CNA血瓊脂平板上的典型菌落形態(tài)為直徑約2mm～3mm,灰白色、半透明、光滑、表面突起、圓形、邊緣整齊,并產(chǎn)生β型溶血。
6.3 鑒定
6.3.1 分純培養(yǎng)
挑取5個(gè)(如小于5個(gè)則全選)可疑菌落分別接種哥倫比亞血瓊脂平板和TSB增菌液,36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。
6.3.2 革蘭氏染色鏡檢
挑取可疑菌落染色鏡檢。β型溶血性鏈球菌為革蘭氏染色陽(yáng)性,球形或卵圓形,常排列成短鏈狀。
6.3.3 觸酶試驗(yàn)
挑取可疑菌落于潔凈的載玻片上,滴加適量3%過氧化氫溶液,立即產(chǎn)生氣泡者為陽(yáng)性。β型溶血性鏈球菌觸酶為陰性。
6.3.4 鏈激酶試驗(yàn)(選做項(xiàng)目)
吸取草酸鉀血漿0.2mL于0.8mL滅菌生理鹽水中混勻,再加入經(jīng)36℃±1℃培養(yǎng)l8h～24h的可疑菌的TSB培養(yǎng)液0.5mL及0.25%氯化鈣溶液0.25mL,振蕩搖勻,置于36℃±1℃水浴中10min,血漿混合物自行凝固(凝固程度至試管倒置,內(nèi)容物不流動(dòng))。繼續(xù)36℃±1℃培養(yǎng)24h,凝固塊重新完全溶解為陽(yáng)性,不溶解為陰性,β型溶血性鏈球菌為陽(yáng)性。
6.3.5 其他檢驗(yàn)
使用生化鑒定試劑盒或生化鑒定卡對(duì)可疑菌落進(jìn)行鑒定。
………………
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