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1.范圍

本標準規定了食品乳品檢測牛磺酸的測定方法。

本標準適用于食品乳品檢測牛磺酸的測定。

2.規范性引用文件

本標準檢測引用的文件對于本標準的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本標準。凡是不注日期的引用文件,其*新版本(包括所有的修改單)適用于本標準。

**法0PA柱后衍生法

3.原理

樣品用偏磷酸溶液溶解,經超聲波振蕩提取、離心、微孔濾膜過濾后,通過鈉離子色譜柱分離,與鄰苯二甲醛(OPA)衍生反應,用熒光檢測器進行檢測,外標法定量。

4.試劑材料

除非另有規定,所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規定的一級水。

4.1偏磷酸(HPO3)。

4.2檸檬酸三鈉(Na3C6H7O7·2H2O)。

4.3苯酚(C6H6O)。

4.4硝酸(HNO3)。

4.5甲醇(CH3OH):色譜純。

4.6硼酸(H3BO3)。

4.7氫氧化鉀(KOH)

4.8鄰苯二甲醛(C8H6O2)(OPA)。

4.92-巰基乙醇(C2H6OS)。

4.10聚氧乙烯月桂酸醚(Brij-35)。

4.11牛磺酸標準品:純度≥99%。

4.12偏磷酸溶液(10g/L):稱取10.0g偏磷酸(4.1),用水溶解并定容至1000mL。

4.13檸檬酸緩沖液:稱取19.6g檸檬酸三鈉(4.2),加950mL水溶解,加1m1苯酚(4.3),用硝酸(4.4)調pH值至3.10～3.25,經0.45μm微孔濾膜過濾。

4.14柱后熒光衍生溶劑(鄰苯二甲醛溶液)。

4.14.1硼酸鉀溶液(0.5mol/L):稱取30.9g硼酸(4.6),26.3g氫氧化鉀(4.7),用水溶解并定容至1000mL。

4.14.2鄰苯二甲醛衍生溶液:稱取0.60g鄰苯二甲醛(4.8),用10mL甲醇(4.5)溶解后,加入0.5mL2-巰基乙醇(4.9)0.35gBrij-35(4.10),用0.5mol/L的硼酸鉀溶液(4.14.1)定容至1000mL,經0.45μm微孔濾膜過濾。臨用前配制。

4.15牛磺酸標準溶液

4.15.1牛磺酸標準儲備溶液(1mg/mL):準確稱取0.1000g牛磺酸標準品(4.11),用水溶解并定容至100mL。儲備液在4℃下可保存7天。

4.15.2牛磺酸標準工作液:將牛磺酸標準儲備液(4.15.1)用水稀釋制備一系列標準溶液,標準系列濃度為:0、5、10、15、20μg/mL。臨用前配制。

5.儀器設備

5.1高效液相色譜儀,帶有熒光檢測器。

5.2柱后反應器。

5.3熒光衍生溶劑輸液泵。

5.4超聲波振蕩器。

5.5pH計:精度為0.01。

5.6離心機:轉速≥5000轉/分鐘。

5.70.45μm微孔濾膜。

5.8天平:感量為1mg,0.1mg。

6.分析步驟

6.1試樣的處理

準確稱取固體樣品1g～5g試樣,液體樣品5g～20g(精確至0.01g,試樣檢測含牛磺酸5μg以上),加30mL偏磷酸溶液(4.12)溶解,充分搖勻,移入100mL容量瓶檢測;放入超聲波振蕩器檢測振蕩10min～15min,取出冷卻至室溫后,用水定容至刻度;樣液在5000轉/分鐘條件下離心10min,取上清液經0.45μm微孔膜(5.7)過濾,接取檢測間濾液以備進樣。

6.2測定

6.2.1參考色譜條件

色譜柱:鈉離子氨基酸分析專用柱(250mm×4.6mm)或同等性能的色譜柱。

流動相:檸檬酸緩沖液(4.13)。

流動相流速:0.30mL/min。

《GB5413.26-2010食品乳品檢測牛磺酸的測定》