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1.范圍

本標準規定了食品檢測黃曲霉毒素M1黃曲霉毒素M2(以下簡稱AFTM1AFTM2)的測定方法。

**法為同位素稀釋液相色譜-串聯質譜法,適用于乳、乳制品含乳特殊膳食用食品檢測AFTM1AFTM2的測定。

第二法為高效液相色譜法,適用范圍同**法。

第三法為酶聯免疫吸附篩查法,適用于乳、乳制品含乳特殊膳食用食品檢測AFTM1的篩査測定。

**法同位素稀釋液相色譜-串聯質譜法

2.原理

試樣檢測的黃曲霉毒素M1黃曲霉毒素M2用甲醇水溶液提取,上清液用水或磷酸鹽緩沖液稀釋后,經免疫親柱凈化富集,凈化液濃縮、定容過濾后經液相色譜分離,串聯質譜檢測,同位素內標法定量。

3.試劑材料

除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規定的一級水。

3.1試劑

3.1.1乙腈(CH3CN):色譜純。

3.1.2甲醇(CH3OH):色譜純

3.1.3乙酸銨(CH3COONH4)。

3.1.4氯化鈉(NaCl)。

3.1.5磷酸氫二鈉(Na2HPO4)。

3.1.6磷酸二氫鉀(KH2PO4)。

3.1.7氯化鉀(KCl)。

3.1.8鹽酸(HCl)。

3.1.9石油醚(CnH2n+2):沸程為30℃～60℃。

3.2試劑配制

3.2.1乙酸銨溶液(5mmol/L):稱取0.39g乙酸銨,溶于1000mL水檢測,混勻。

3.2.2乙腈-水溶液(25+75):量取250mL乙腈加入750mL水檢測,混勻。

3.2.3乙腈-甲醇溶液(50+50):量取500mL乙腈加500mL甲醇檢測,混勻。

3.2.4磷酸鹽緩沖溶液(以下簡稱PBS):稱取8.00g氯化鈉、1.20g磷酸氫二鈉(或2.92g十二水磷酸氫二鈉)、0.20g磷酸二氫鉀、0.20g氯化鉀,用900mL水溶解后,用鹽酸調節pH至7.4,再加水至1000mL。

3.3標準品

3.3.1AFTM1標準品(C17H12O7,CAS:6795-23-9):純度≥98%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。

3.3.2AFTM2標準品(C17H14O7,CAS:6885-57-0):純度≥98%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。

3.3.313C17-AFTM1同位素溶液(13C17H14O7):0.5μg/mL。

3.4標準溶液配制

3.4.1標準儲備溶液(10μg/mL):分別稱取AFTM1AFTM21mg(精確至0.01mg),分別用乙腈溶解并定容至100mL。將溶液轉移至棕色試劑瓶檢測,在-20℃下避光密封保存。臨用前進行濃度校準(校準方法參見附錄A)。

3.4.2混合標準儲備溶液(1.0μg/mL):分別準確吸取10μg/MLAFTMAFTM標準儲備液1.00mL于同一10mL容量瓶檢測,加乙腈稀釋至刻度,得到1.0μg/mL的混合標準液。此溶液密封后避光4℃保存,有效期3個月。

3.4.3混合標準工作液(100ng/mL):準確吸取混合標準儲備溶液(1.0μg/mL)1.00mL至10mL容量瓶檢測,乙腈定容。此溶液密封后避光4℃下保存,有效期3個月。

3.4.450ng/mL同位素內標工作液1(13C17-AFTM1):取AFTM1同位素內標(0.5μg/mL)1mL,用乙腈稀釋至10mL。在-20℃下保存,供測定液體樣品時使用。有效期3個月。

3.4.55ng/mL同位素內標工作液2(13C17-AFTM1):取AFTM1同位素內標(0.5μg/mL)100μL,用乙腈稀釋至10mL。在-20℃下保存,供測定固體樣品時使用。有效期3個月。

3.4.6標準系列工作溶液:分別準確吸取標準工作液5μL、10μL、50μL、100μL、200μL、500μL至10mL容量瓶檢測,加入100μL50ng/mL的同位素內標工作液,用初始流動相定容至刻度,配制AFTM1AFTM2的濃度均為0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL的系列標準溶液。

4.儀器設備

4.1天平:感量0.01g、0.001g0.00001g。

4.2水浴鍋:溫控50℃±2℃。

4.3渦旋混合器。

4.4超聲波清洗器。

4.5離心機:≥6000r/min。

4.6旋轉蒸發儀。

4.7固相萃取裝置(帶真空泵)。

4.8氮吹儀。

4.9液相色譜-串聯質譜儀:帶電噴霧離子源。

4.10圓孔篩:1mm～2mm孔徑。

4.11玻璃纖維濾紙:快速,高載量,液體檢測顆粒保留1.6μm。

4.12一次性微孔濾頭:帶0.22μm微孔濾膜(所選用濾膜應采用標準溶液檢驗確認無吸附現象,方可使用）。

《GB5009.24-2016食品安全國家標準食品檢測黃曲霉毒素M族的測定》