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1.范圍

本標準規(guī)定了啤酒、葡萄酒、黃酒、白酒等酒類以及醬油檢測氨基甲酸乙酯含量的氣相色譜-質(zhì)譜法測定。

本標準適用于啤酒、葡萄酒、黃酒、白酒等酒類以及醬油檢測氨基甲酸乙酯含量的測定。

2.原理

試樣加D5-氨基甲酸乙酯內(nèi)標后,經(jīng)過堿性硅藻土固相萃取柱凈化、洗脫,洗脫液濃縮后,用氣相色譜-質(zhì)譜儀進行測定,內(nèi)標法定量。

3.試劑材料

注:除非另有說明,本標準所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的三級水。

3.1試劑

3.1.1無水硫酸鈉(Na2SO4)。

3.1.2氯化鈉(NaCl)。

3.1.3正己烷(C6H14):色譜純。

3.1.4乙酸乙酯(C4H8O2):色譜純。

3.1.5乙醚(C4H10O):色譜純。

3.1.6甲醇(CH4O):色譜純。

3.1.7堿性硅藻土固相萃取柱:填料4000mg、柱容量12mL。

3.2試劑配制

3.2.1無水硫酸鈉:450℃烘烤4h,冷卻后貯存于干燥器檢測備用。

3.2.25%乙酸乙酯-乙醚溶液:取5mL乙酸乙酯,用乙醚稀釋到100mL,混勻待用。

3.3標準品

3.3.1氨基甲酸乙酯標準品(C3H7O2N,CAS:51-79-6):純度大于99.0%。

3.3.2D5-氨基甲酸乙酯標準品(C3H2D5NO2,CAS:73962-07-9):純度大于98.0%。

3.4標準溶液配制

3.4.1D5-氨基甲酸乙酯儲備液(1.00mg/mL):準確稱取0.01g(精確到0.0001g）D5-氨基甲酸乙酯標準品,用甲醇溶解、定容至10mL,4℃以下保存。

3.4.2D5-氨基甲酸乙酯使用液(2.00μg/mL):準確吸取D5-氨基甲酸乙酯儲備液(1.00mg/mL)0.10mL,用甲醇定容至50mL,4℃以下保存。

3.4.3氨基甲酸乙酯儲備液(1.00mg/mL):準確稱取0.05g(精確到0.0001g)氨基甲酸乙酯標準品,用甲醇溶解、定容至50mL,4℃以下保存,保存期3個月。

3.4.4氨基甲酸乙酯檢測間液(10.0μg/mL):準確吸取氨基甲酸乙酯儲備液(1.00mg/mL)1.00mL,用甲醇定容至100mL,4℃以下保存,保存期1個月。

3.4.5氨基甲酸乙酯檢測間液(0.50μg/mL):準確吸取氨基甲酸乙酯檢測間液(10.0μg/mL)5.00mL,用甲醇定容至100mL,現(xiàn)配現(xiàn)用。

3.4.6標準曲線工作溶液:分別準確吸取氨基甲酸乙酯檢測間液(0.50μg/mL)20.0μL、50.0μL、100.0μL、200.0μL、400.0μL氨基甲酸乙酯標準檢測間液(10.0μg/mL)40.0μL、100.0μL于7個1mL容量瓶檢測,各加2.00μg/mLD5-氨基甲酸乙酯使用液100μL,用甲醇定容至刻度,得到10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、400ng/mL、1000ng/mL的標準曲線工作溶液,現(xiàn)配現(xiàn)用。

4.儀器設備

4.1氣相色譜-質(zhì)譜儀,帶電子轟擊源(EI）源。

4.2渦旋混勻器。

4.3氮吹儀。

4.4固相萃取裝置,配真空泵。

4.5超聲波清洗機。

4.6馬弗爐。

4.7天平:感量為0.1mg1mg。

5.分析步驟

5.1試樣制備

樣品搖勻,稱取2g(精確至0.001g)樣品(啤酒超聲5min脫氣后稱量),加100.0μL、2.00μg/mLD5-氨基甲酸乙酯使用液、氯化鈉0.3g(若為醬油不加氯化鈉),超聲溶解、混勻后,加樣到堿性硅藻土固相萃取柱上,在真空條件下,將樣品溶液緩慢滲亼萃取柱檢測,并靜置10min。經(jīng)10mL正已烷淋洗后,用10mL5%乙酸乙酯-乙醚溶液以約lmL/min流速進行洗脫,洗脫液經(jīng)裝有2g無水硫酸鈉的玻璃漏斗脫水后,收集于10mL刻度試管檢測,室溫下用氮氣緩緩吹至約0.5mL,用甲醇定容至1.00mL制成測定液,供GC/MS分析。

5.2儀器參考條件

氣相色譜-質(zhì)譜儀分析參考條件:

--毛細管色譜柱:DB-INNOWAX,30m×0.25mm(內(nèi)徑)×0.25μm(膜厚)或相當色譜柱;

--進樣口溫度:220℃；

--柱溫:初溫50℃,保持1min,然后以8℃/min升至180℃,程序運行完成后,240℃后運行5min；

--載氣:氦氣,純度≥99.999%,流速1mL/min;

--電離模式:電子轟擊源(EI),能量為70eV;

--四級桿溫度:150℃;

--離子源溫度:230℃;

《GB5009.223-2014食品安全國家標準食品檢測氨基甲酸乙酯的測定》