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1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了出口動物源性食品檢測安眠酮殘留量檢驗的制樣高效液相色諧測定方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬肉、豬肝、豬腎奶檢測安眠酮殘留量的測定。

2規(guī)范性引用文件

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GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格試驗方法

3方法提要

試樣檢測的安眠酮用二氯甲烷提取，提取液經(jīng)濃縮、固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜儀檢測。外標(biāo)法定量。

4試劑材料

除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

4.1乙腈：高效液相色諧純。

4.2甲醇：高效液相色譜純。

4.3丙酮：高效液相色譜純。

4.4正已烷：高效液相色譜純。

4.5二氯甲烷：高效液相色譜純。

4.6乙酸銨。

4.7氫氧化鈉

4.8無水硫酸鈉：經(jīng)650℃灼燒4h，置于干燥器內(nèi)備用。

4.9乙酸銨溶液(25mmol/U)：準(zhǔn)確稱取乙酸銨1.925g，用水定容至1000mL。經(jīng)0.45μm水相濾膜過濾。

4.10氫氧化鈉(1mol/L)：稱取40g氫氧化鈉溶解于800mL水，容量瓶定容至1L。

4.11氫氧化鈉(0.1mol/L)：稱取4g氫氧化鈉溶解于800mL水，容量瓶定容至1L。

4.12乙腈飽正己烷：正己烷與足夠的乙腈混合，至飽。

4.13洗脫液：乙腈+丙酮(5+5，體積比)，取50mL乙腈，加入50mL丙酮，混勻備用。

4.14流動相：乙腈+25mmol/L乙酸胺(4+6，體積比)，取400mL乙腈，加入600mL25mmmol/L乙酸胺(4.9)，超聲混勻備用。

4.15安眠酮標(biāo)準(zhǔn)品(methaqualone，C16H14N2O，相對分子質(zhì)量250.29，CAS號：340-56-7)：純度>99.0%。

4.16安眠酮標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確移取安眠酮標(biāo)準(zhǔn)品(4.15)1.00mL，濃度為10.00mg/L，用乙腈稀釋并定容至10mL，濃度為1.00mg/L，0℃~5℃冰箱保存。根據(jù)需要再配成適用濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

4.17固相萃取柱：60mg/3mHLB：C18SPE，或其他等同效果的固相萃取柱。

4.18有相機、水相針頭濾膜：0.45μm。

5儀器設(shè)備

5.1高效液相色譜儀帶紫外可見波長檢測器或二*管陣列檢測器。

5.2離心機：轉(zhuǎn)速不低干4000r/min。

5.3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

5.4分析天平：感量0.0001g。

5.5渦旋振蕩器。

5.6勻漿機。

5.7肉類組織粉碎機。

5.8超聲波水浴。

5.9固相萃取裝置

5.10離心管：50mL，5mL。

6樣品的制備保存

取樣品去皮去筋約500g，用肉類組織粉碎機絞碎，裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標(biāo)明標(biāo)記。制樣的操作過程檢測，應(yīng)防止樣品污染或發(fā)生殘留物含量的變化。試樣置于-18℃以下保存，奶試樣置于0℃~4℃以下保存。

7提取凈化

7.1提取

7.1.1肌肉組織、肝臟、腎臟等

稱取5g(精確到0.01g)組織樣品10g無水硫酸鈉(4.8)于50mL離心管檢測，加人1mL1mol/L氫氧化鈉20mL二氯甲烷提取液，均質(zhì)提取1min，4000r/min離心5min，上清液經(jīng)快速定性濾紙過濾到100mL濃縮瓶檢測，殘渣用20mL二氯甲烷超聲提取10min，4000/min離心5min，合并二氯甲烷，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。殘留物(7.1.1)檢測加人1mL流動相(4.14)，充分渦旋振蕩，轉(zhuǎn)移至5mL離心管檢測，加入3mL乙腈飽正己烷(4.12)，渦旋混勻，4000r/min離心5min，棄去上層正已烷層，原離心管檢測再加入3mL乙腈飽正己烷，渦旋混勻，4000r/min離心5min，下層加0.1mol/L的氫氧化鈉稀釋至5mL作待凈化液。

7.1.2奶類等

稱取2g(精確到0.01g)試樣于50mL離心管檢測，加入1mL1mol/L氫氧化鈉20mL二氯甲烷提取液，超聲提取10min，再振蕩提取10min，4000r/min離心5min，上清液經(jīng)快速定性濾紙過濾到100mL濃縮瓶檢測，用二氯甲烷定容到20mL，移取5mL濾液，加人5mL水混勻后作待凈化液。

7.2凈化

用3mL甲醇、3mL0.1mol/L的氫氧化鈉以lmL/min的流速淋洗活化萃取柱(4，17)，然后將待凈化液通過柱子(控制流速小于0.5mL/min)，依次用3mL0.1mol/L的氫氧化鈉、3mL甲醇以1mL/min的流速過柱淋洗，*后用5mL洗脫液(4.13)洗脫(控制流速小于0.5mL/min)，收集洗脫液于25mL濃縮瓶檢測，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加1mL流動相(4.14)溶解殘渣，溶液過0.45m有機相針頭濾膜后進行高效液相色譜儀測定。