檢測及試驗方法

　　試驗部分

　　原理

　　在硫酸介質(zhì)中甜蜜素與亞硝酸鈉反應(yīng)，生成環(huán)己醇亞硝酸酯，利用氣相色譜法進行定性和定量。

　　試劑(所用試劑不做說明皆為分析純，水為蒸餾水)

　　 甜蜜素儲備溶液：稱取1.000 0g甜蜜素(含量≥99.0%)，加水溶解并定容至100mL，此溶液濃度為10.00mg/mL，為儲備液。置于4℃的冰箱中。本次試驗溶液濃度為：10.320 mg/mL

　　 甜蜜素標準使用溶液：取1.2.1儲備液10mL，加水定容至100mL，為使用液，濃度為1.000 0mg/mL。本次試驗使用溶液濃度為：1.0320 mg/mL

　　100g/L硫酸溶液：稱取50g濃硫酸，用水定容至500mL。

　　 50g/L亞硝酸鈉溶液：稱取25g亞硝酸鈉，用水定容至500mL。

　　 正己烷

　　 甲苯(內(nèi)標)

　　 乙酸丁酯(內(nèi)標)

　　 氯化鈉

　　樣品前處理

　　內(nèi)標溶液的配置：在正己烷中加入一定量的內(nèi)標(乙酸丁酯和甲苯)1，加入的量以出色譜峰合適為宜。一般為500mL正己烷中加入內(nèi)標100μL～200μL。本次實驗乙酸丁酯的濃度為0.1344mg/mL(稱量0.0672g乙酸丁酯于裝有10mL左右正己烷的25mL容量瓶中，再將溶液轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中并定容至刻度線，搖勻，備用。　

    　標準溶液前處理：吸取上述標準溶液10 mL于50mL比色管中，加10mL水，搖勻，置于冰浴中。加入5mL50g/L亞硝酸鈉溶液，5mL100g/L硫酸溶液，在冰浴中放置30min，并時常搖動，然后準確加入10mL溶劑，5g氯化鈉，搖勻后振搖80次。靜置分層。吸出正己烷層于10mL帶塞離心管中進行離心分層(如有機溶劑和水相很快就有分層或只要進樣針能吸出提取的溶劑，就可以不需離心分離這一步驟)，吸取正己烷層1μL注入色譜儀進行分析。算出校正因子。　

   　液體樣品前處理：稱取試樣20.0g于50mL帶塞比色管中，加10mL水。搖勻，置于冰浴中。處理過程同標準溶液前處理。吸取正己烷層試樣1μL注入色譜儀進行分析。

　　固體樣品前處理：稱取已磨碎(剪碎)試樣2.0～10.0g(根據(jù)樣品中甜蜜素含量而定稱取質(zhì)量，使甜蜜素的量在1～10mg之間)于50mL帶塞比色管中，加10mL水。一些樣品不易溶解，如蜜餞類、山楂等，置于水浴鍋中煮沸15min左右，冷卻至60℃以下，置于冰浴中。處理過程同標準溶液前處理。吸取正己烷層試樣1μL注入色譜儀進行分析。

　　結(jié)果與討論

　　分析方法的線性相關(guān)性的測定

　　分別吸取標準溶液1mL、3mL、5mL、10mL、20mL于5個100mL容量瓶中，并定容至刻度，配成濃度分別為0.1032mg/mL、0.3096mg/mL、0.5160mg/mL、1.0320mg/mL、2.0640 mg/mL的標準溶液。分別吸取以上標準溶液10 mL于5支50 mL比色管中，按方法進行處理。每個標準點分別進樣5次，每次進樣1μL，以甜蜜素與內(nèi)標物的質(zhì)量比為橫坐標，甜蜜素與內(nèi)標物的峰面積比(取五次進樣平均值)為縱坐標繪制標準曲線，得線性方程為y=0.43991x-0.00088，其線性相關(guān)系數(shù)為0.99999。　　求出相對校正因子及其平均值。

　　分析方法的準確度的測定

　　從市場上購買一種不含甜蜜素的飲料(樣品名稱：鮮橙多橙汁飲料生產(chǎn)單位：昆山統(tǒng)一企業(yè)食品有限公司凈含量：2L生產(chǎn)日期：20060307)，稱取5份一定量的試樣，用移液管分別加入標準溶液1、3、5、10、15mL，按上述氣相色譜操作條件測定甜蜜素回收率，結(jié)果都在99.7%～101.1%之間。

　　分析方法的精密度的測定

　　從市場上購買一種含有甜蜜素的飲料(樣品名稱：鮮橙多生產(chǎn)單位：康裕食品有限公司凈含量：1.5L生產(chǎn)日期：20060415)，從同一產(chǎn)品中稱取五個試樣。按方法進行處理后，按上述氣相色譜操作條件測定甜蜜素含量，得到標準偏差為0.0027，變異系數(shù)(RSD)為0.55%。