1范圍
本標準規定了液相色譜法測定游離核苷酸總量的方法。
本標準適用于嬰幼兒食品和乳品中游離核苷酸總量(包括胞嗜啶核苷酸,尿密啶核苷酸,次黃嘌呤核苷酸,鳥嘌呤核苷酸,腺廩呤核苷酸)的測定。
2原理
試樣經過水提取,用沉淀劑沉淀蛋白質后,通過高效液相色譜分離,用紫外檢測器外標法測定試樣中核苷酸的含量。
3試劑與材料
除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規定的三級水,液相色譜流動相用水為GB/T 6682規定的一級水。
3.1試劑
3.1.1淀粉酶;酶活力≥1.5 U/mg.3.1.2冰乙酸(CH,COOH)。
3.1.3四丁基硫酸氫銨[(C.H,),NHSO,].3.1.4甲醇(CH,OH)。
3.1.5磷酸氫二鉀(KzHPOx).3.1.6磷酸二氫鉀(KH,PO).3.1.7磷酸(H,PO,).
3.2試劑配制
3.2.1乙酸溶液(100 mL/L):吸取10 mL.冰乙酸,加水定容到100 mL。
3.2.2︰磷酸氫二鉀溶液(0.1 mol/1.):稱取⒉.28 g磷酸氫二鉀,用超純水溶解并定容到100 mL。
3.2.3磷酸鹽緩沖液(1.40 mmol/L.四丁基硫酸氫銨,0.01 mol/L.磷酸二氫鉀):稱取1.360 g磷酸二氫鉀.加0.475 3 g四丁基硫酸氫銨,加 900 mL水溶解,用磷酸氫二鉀溶液調pH 至3.2,用水定容到1 000 mL。一周內使用。
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