發(fā)光細(xì)菌法適用于水質(zhì)、工業(yè)廢水、納污水體及實(shí)驗(yàn)室條件下可溶性化學(xué)物質(zhì)的水質(zhì)等急性毒性檢測(cè)。發(fā)光細(xì)菌法測(cè)定是一種簡(jiǎn)便快速的生物毒性檢測(cè)方法,它不僅能測(cè)試?yán)砘ㄋ軠y(cè)定的單因子指標(biāo),尤其能快速準(zhǔn)確的測(cè)試出環(huán)境的綜合毒性指標(biāo),具有理化法和傳統(tǒng)生物監(jiān)測(cè)法無(wú)可比擬特點(diǎn)。

1、方法提要

基于發(fā)光細(xì)菌相對(duì)發(fā)光度與水樣毒性組分總濃度呈顯著負(fù)相關(guān)伊< 0.05)，因而可通過(guò)生物發(fā)光光度計(jì)測(cè)定水樣的相對(duì)發(fā)光度，以此表示其急性毒性水平。

水質(zhì)急性毒性水平按8所述條件選用相當(dāng)?shù)膮⒈榷疚锫然瘽舛?以mg/L為單位)來(lái)表征，或選用ECSO值(半數(shù)有效濃度一一以樣品液百分濃度為單位)來(lái)表征。

2、發(fā)光細(xì)菌法簡(jiǎn)介

2.1 發(fā)光細(xì)菌法的原理

發(fā)光細(xì)菌是一類(lèi)非致病的革蘭氏陰性兼性厭氧細(xì)菌, *適溫度20～ 30℃, pH6～ 9.N aCl 濃度3% , 在正常的生理?xiàng)l件下能夠發(fā)射可見(jiàn)熒光的細(xì)菌, 這種可見(jiàn)熒光波長(zhǎng)在450～490nm 之間, 在黑暗處肉眼可見(jiàn). 發(fā)光細(xì)菌法是利用靈敏的光電測(cè)量系統(tǒng)測(cè)定毒物對(duì)發(fā)光細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度的影響。毒物的毒性可以用EC50表示, 即發(fā)光細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度降低50%時(shí)毒物的濃度。發(fā)光細(xì)菌含有熒光素、熒光酶、ATP 等發(fā)光要素,在有氧條件下通過(guò)細(xì)胞內(nèi)生化反應(yīng)而產(chǎn)生微弱熒光。當(dāng)細(xì)胞活性升高, 處于積*分裂狀態(tài)時(shí),其ATP含量高, 發(fā)光強(qiáng)度增強(qiáng)。發(fā)光細(xì)菌在毒物作用下, 細(xì)胞活性下降,ATP含量水平下降, 導(dǎo)致發(fā)光細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度的降低。實(shí)驗(yàn)顯示, 毒物濃度與菌體發(fā)光強(qiáng)度呈線性負(fù)相關(guān)關(guān)系, 因而, 可以根據(jù)發(fā)光細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度判斷毒物毒性大小, 用發(fā)光度表征毒物所在環(huán)境的急性毒性.這種方法是20世紀(jì)70年代后期提出的一種微生物監(jiān)測(cè)新方法, 因其靈敏、快速、簡(jiǎn)便、費(fèi)用低廉則獨(dú)具特色.

2.2  發(fā)光細(xì)菌法測(cè)定方法

(1)  新鮮發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng)物測(cè)定法

將發(fā)光細(xì)菌接種于液體發(fā)光培養(yǎng)基中, 在適當(dāng)條件下(約20℃) 通氣培養(yǎng)12小時(shí)(對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期),用緩沖液稀釋至適當(dāng)?shù)木鷿舛群蠹尤霚y(cè)試管中與試液混合10-20分鐘,讀出樣品管和對(duì)照管的光強(qiáng)度.

(2)  發(fā)光細(xì)菌和藻類(lèi)混合測(cè)定法

有些有毒物對(duì)發(fā)光細(xì)菌無(wú)直接的毒害作用,而對(duì)藻類(lèi)有毒害作用,利用這一特性,把培養(yǎng)好的發(fā)光菌懸液和藻類(lèi)懸液混合后加入測(cè)試管中與試液混合,經(jīng)光照一段時(shí)間后測(cè)定發(fā)光菌的光強(qiáng)度變化.由于毒物對(duì)藻類(lèi)的毒害而干擾藻類(lèi)的光合作用,使之放氧能力下降,發(fā)光菌因缺氧其放光能力也隨機(jī)下降,因此可以根據(jù)光合作用放氧多少而導(dǎo)致發(fā)光菌發(fā)光強(qiáng)度的變化來(lái)推算出毒物毒性的大小.

(3)  發(fā)光細(xì)菌冷凍干燥制劑測(cè)定法

將培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的發(fā)光細(xì)菌采用特殊方法制成干燥粉劑保藏于冰箱中, 使用時(shí)取出加入緩沖液保溫平衡5-10分鐘,使其恢復(fù)到原來(lái)的生理狀態(tài)和發(fā)光水平,然后用于測(cè)試.其特點(diǎn)是每次使用的發(fā)光菌具有相同的生理狀態(tài),對(duì)毒物靈敏性一致,易于定量測(cè)定,結(jié)果重復(fù)性,可比性好,操作簡(jiǎn)便,可長(zhǎng)期保藏,這將是該技術(shù)發(fā)展的方